Safranin O festési protokoll porcokhoz

NovaUltra Special Stain Kits

Megnevezés: Ez a módszer a porc, mucin és hízósejt granulumok kimutatására szolgál formalinban fixált, paraffinba ágyazott szöveti metszeteken, és használható fagyasztott metszeteken is. A porc és a mucin narancssárgától vörösig, a sejtmagok pedig feketére festődnek. A háttér kékes-zöldre festődik.

Fixálás: Formalin fixált, paraffinba ágyazott metszetek.

Oldatok és reagensek:

Weigert’s Iron Hematoxylin Solution:

Törzsoldat A:

Hematoxilin —————————– 1 g

95%-os alkohol —————————– 100 ml

Törzsoldat B:

29% vas-klorid vízben ———– 4 ml

desztillált víz ————————– 95 ml

sósav, tömény —- 1ml

Weigert’s Iron Hematoxylin munkaoldat:

Keverjük össze az A és B törzsoldat egyenlő részeit. Ez a munkaoldat körülbelül 4 hétig stabil.

0,05%-os gyors zöld (FCF) oldat:

Gyors zöld, FCF, C.I. 42053 ————- 0,5 g

Desztillált víz —————————- 1000 ml

1%-os ecetsavas oldat:

Ecetsav, jégsav ————————- 1 ml

Desztillált víz —————————— 99 ml

0,1% Safranin O oldat: ——————– 0,1 g

Desztillált víz —————————– 100 ml

Eljárás:

1. Deparaffinizáljuk és hidratáljuk a tárgylemezeket desztillált vízzel.

2. Fesse meg Weigert vas hematoxilin munkaoldattal 10 percig.

3. Mossuk folyó csapvízben 10 percig.

4. Fessük meg gyors zöld (FCF) oldattal 5 percig.

5. Öblítsük gyorsan 1%-os ecetsavas oldattal legfeljebb 10-15 másodpercig.

6. Fessük 0,1%-os szafranin O oldattal 5 percig.

7. Dehidratáljuk és tisztítsuk 95%-os etil-alkohollal, abszolút etil-alkohollal és xilollal, 2 váltással, egyenként 2 percig.

8. Rögzítsük gyantás közeggel.

Eredmények:

Magok ———————————————- fekete

Citoplazma —————————————– kékeszöld

Porc, mucin, hízósejt szemcsék ———– narancssárgától a vörösig

Képek keresése

3. Camplejohn KL, Allard SA. A safranin ‘O’ festés korlátai proteoglikán-hiányos porcokban, monoklonális antitestekkel demonstrálva.Histochemistry. 1988;89(2):185-8. PubMed Abstract