Safraniini O -värjäysprotokolla rustoa varten

NovaUltra-erikoisvärjäyssarjat

Kuvaus: Tätä menetelmää käytetään ruston, musiinin ja syöttösolurakkuloiden havaitsemiseen formaliinilla kiinnitetyissä, parafiiniin upotetuissa kudosleikkeissä, ja sitä voidaan käyttää myös jäädytetyissä leikkeissä. Rusto ja mukiini värjäytyvät oranssista punaiseen, ja tumat värjäytyvät mustiksi. Tausta värjäytyy sinertävän vihreäksi.

Fiksointi: Formaliinifiksoidut, parafiiniin upotetut leikkeet.

Liuokset ja reagenssit:

Weigertin rautahematoksyliiniliuos:

Varastoliuos A:

Hematoksyliini —————————– 1 g

95 % alkoholi —————————– 100 ml

Varastoliuos B:

29 % rautakloridi vedessä ———– 4 ml

Tislattu vesi ————————– 95 ml

Suolahappo, väkevöity —- 1ml

Weigert’s Iron Hematoxylin Working Solution:

Sekoita yhtä suuret osat kantaliuoksista A ja B. Tämä käyttöliuos säilyy noin 4 viikkoa.

0,05 % Fast Green (FCF) -liuos:

Fast green, FCF, C.I. 42053 ————- 0.5 g

Tislattu vesi —————————- 1000 ml

1% etikkahappoliuos:

Etikkahappo, jäähappo ————————- 1 ml

Tislattu vesi —————————— 99 ml

0.1% Safranin O -liuos:

Safranin O, C.I. 50240 ——————– 0,1 g

Tislattu vesi —————————– 100 ml

Menetelmä:

1. Deparaffinoidaan ja hydratoidaan objektilasit tislattuun veteen.

2. Värjätään Weigertin rautahematoksiini-työliuoksella 10 minuutin ajan.

3. Pestään juoksevassa vesijohtovedessä 10 minuuttia.

4. Värjätään nopealla vihreällä (FCF) liuoksella 5 minuutin ajan.

5. Huuhtele nopeasti 1 % etikkahappoliuoksella enintään 10 -15 sekunnin ajan.

6. Värjätään 0,1 % safraniini O -liuoksella 5 minuutin ajan.

7. Dehydratoidaan ja kirkastetaan 95-prosenttisella etyylialkoholilla, absoluuttisella etyylialkoholilla ja ksyleenillä käyttäen 2 vaihtoa kutakin, 2 minuuttia kutakin.

8. Kiinnitetään hartsialustalla.

Tulokset:

Ytimet ———————————————- musta

Sytoplasma —————————————– sinertävän vihreä

Rusto, mucin, mast cell granules ———– oranssista punaiseen

Find Images

3. Camplejohn KL, Allard SA. Limitations of safranin ’O’ staining in proteoglycan-depleted cartilage demonstrated with monoclonal antibodies.Histochemistry. 1988;89(2):185-8. PubMed Abstract