Safranin O Färbeprotokoll für Knorpel

NovaUltra Spezialfärbe-Kits

Beschreibung: Diese Methode wird für den Nachweis von Knorpel, Muzin und Mastzellgranulat in formalinfixierten, paraffineingebetteten Gewebeschnitten verwendet und kann auch für Gefrierschnitte verwendet werden. Knorpel und Muzin werden orange bis rot und die Zellkerne schwarz gefärbt. Der Hintergrund ist bläulich-grün gefärbt.

Fixierung: Formalinfixierte, in Paraffin eingebettete Schnitte.

Lösungen und Reagenzien:

Weigert’s Iron Hematoxylin Solution:

Stammlösung A:

Hämatoxylin —————————– 1 g

95% Alkohol —————————– 100 ml

Stammlösung B:

29% Eisenchlorid in Wasser ———– 4 ml

Destilliertes Wasser ————————– 95 ml

Salzsäure, konzentriert —- 1ml

Weigert’s Iron Hematoxylin Arbeitslösung:

Mischen Sie gleiche Teile der Stammlösung A und B. Diese Arbeitslösung ist etwa 4 Wochen lang stabil.

0,05% Fast Green (FCF) Lösung:

Fast Green, FCF, C.I. 42053 ————- 0,5 g

Destilliertes Wasser —————————- 1000 ml

1%ige Essigsäurelösung:

Essigsäure, eisig ————————- 1 ml

Destilliertes Wasser —————————— 99 ml

0,1% Safranin O Lösung:

Safranin O, C.I. 50240 ——————– 0,1 g

Destilliertes Wasser —————————– 100 ml

Vorgehen:

1. Objektträger entparaffinieren und in destilliertem Wasser hydratisieren.

2. 10 Minuten lang mit Weigters Eisenhämatoxylin-Arbeitslösung färben.

3. 10 Minuten lang unter fließendem Leitungswasser waschen.

4. 5 Minuten lang mit schnell grüner Lösung (FCF) färben.

5. Schnelles Spülen mit 1%iger Essigsäurelösung für nicht mehr als 10 -15 Sekunden.

6. 5 Minuten lang in 0,1%iger Safranin O-Lösung färben.

7. entwässern und mit 95%igem Äthylalkohol, absolutem Äthylalkohol und Xylol klären, jeweils 2 Wechsel, je 2 Minuten.

8. mit harzigem Medium montieren.

Ergebnisse:

Zellkerne ———————————————- schwarz

Zytoplasma —————————————– bläulich grün

Knorpel, Muzin, Mastzellgranula ———– orange bis rot

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3. Camplejohn KL, Allard SA. Limitations of safranin ‚O‘ staining in proteoglycan-depleted cartilage demonstrated with monoclonal antibodies.Histochemistry. 1988;89(2):185-8. PubMed Abstract