Safranin O Staining Protocol for Cartilage

NovaUltra Special Stain Kits

Opis: Metoda ta jest stosowana do wykrywania chrząstki, mucyny i ziarnistości komórek tucznych na utrwalonych w formalinie, zatopionych w parafinie przekrojach tkankowych, może być również stosowana do przekrojów mrożonych. Chrząstka i mucyna będą zabarwione na kolor od pomarańczowego do czerwonego, a jądra będą zabarwione na czarno. Tło jest zabarwione na niebieskozielono.

Utrwalanie: Sekcje utrwalone w formalinie, zatopione w parafinie.

Roztwory i odczynniki:

Weigert’s Iron Hematoxylin Solution:

Stock Solution A:

Hematoxylin —————————– 1 g

95% Alcohol —————————– 100 ml

Stock Solution B:

29% chlorek żelazowy w wodzie ———– 4 ml

Woda destylowana ————————– 95 ml

Kwas solny, stężony —- 1ml

Hematoksylina żelazowa Weigerta Roztwór roboczy:

Zmieszać równe części roztworu podstawowego A i B. Ten roztwór roboczy jest stabilny przez około 4 tygodnie.

0,05% Fast Green (FCF) Roztwór roboczy:

Zieleń szybka, FCF, C.I. 42053 ————- 0,5 g

Woda destylowana —————————- 1000 ml

1% Roztwór kwasu octowego:

Acetic acid, glacial ————————- 1 ml

Woda destylowana —————————— 99 ml

0,1% Safranin O Solution:

Safranin O, C.I. 50240 ——————– 0,1 g

Woda destylowana —————————– 100 ml

Procedura:

1. Deparafinować i uwodnić szkiełka do wody destylowanej.

2. zabarwić roztworem roboczym hematoksyliny żelazowej Weigerta na 10 minut.

3. przemyć w bieżącej wodzie z kranu przez 10 minut.

4. Barwić roztworem szybkiej zieleni (FCF) przez 5 minut.

5. Szybko spłukać 1% roztworem kwasu octowego przez nie więcej niż 10-15 sekund.

6. barwić w 0,1% roztworze safraniny O przez 5 minut.

7. Odwodnić i oczyścić 95% alkoholem etylowym, absolutnym alkoholem etylowym i ksylenem, stosując 2 zmiany, każda po 2 minuty.

8. Zamontować używając medium żywicznego.

Wyniki:

Jądra ———————————————- czarny

Cytoplazma —————————————– niebieskozielony

Chrząstki, mucyna, granulki komórek tucznych ———– pomarańczowy do czerwonego

Find Images

3. Camplejohn KL, Allard SA. Limitations of safranin 'O’ staining in proteoglycan-depleted cartilage demonstrated with monoclonal antibodies.Histochemistry. 1988;89(2):185-8. PubMed Abstract

.