Protokoll för färgning av brosk med Safranin O

NovaUltra Special Stain Kits

Beskrivning: Denna metod används för att påvisa brosk, mucin och mastcellsgranuler på formalinfixerade, paraffinininbäddade vävnadssektioner och kan även användas för frysta sektioner. Brosket och mucinet färgas orange till rött och kärnorna färgas svart. Bakgrunden färgas blågrön.

Fixering: Formalinfixerade, paraffininbäddade sektioner.

Lösningar och reagenser:

Weigert’s Iron Hematoxylin Solution:

Weigert’s Iron Hematoxylin Solution:

Lagerlösning A:

Hematoxylin —————————– 1 g

95% alkohol —————————– 100 ml

Lagerlösning B:

29 % järnklorid i vatten ———– 4 ml

Destillerat vatten ————————– 95 ml

Koncentrerad saltsyra —- 1 ml

Weigert’s Iron Hematoxylin Working Solution:

Blanda lika delar av stamlösningarna A och B. Denna arbetslösning är stabil i ca 4 veckor.

0,05% Fast Green (FCF) lösning:

Fast green, FCF, C.I. 42053 ————- 0,5 g

Destillerat vatten —————————- 1000 ml

1% ättiksyralösning:

Isättiksyra ————————- 1 ml

Destillerat vatten —————————— 99 ml

0,1 % Safranin O-lösning:

Safranin O, C.I. 50240 ——————– 0,1 g

Destillerat vatten —————————– 100 ml

Procedur:

1. Avparaffinera och hydrera objektglasen i destillerat vatten.

2. Färga med Weigert’s järnhematoxylinarbetslösning i 10 minuter.

3. Tvätta i rinnande kranvatten i 10 minuter.

4. Färga med snabbgrön (FCF) lösning i 5 minuter.

5. Skölj snabbt med 1 % ättiksyralösning i högst 10-15 sekunder.

6. Färga i 0,1 % safranin O-lösning i 5 minuter.

7. Dehydrera och rensa med 95 % etylalkohol, absolut etylalkohol och xylen, med två byten vardera, 2 minuter vardera.

8. Montera med hjälp av hartsmedium.

Resultat:

Kärnor ———————————————- svart

Cytoplasma —————————————– blågrön

Brosk, mucin, mastcellsgranulat ———– orange till rött

Hitta bilder

3. Camplejohn KL, Allard SA. Begränsningar av safranin ’O’-färgning i proteoglykanutarmat brosk påvisade med monoklonala antikroppar. histokemi. 1988;89(2):185-8. PubMed Abstract