Protocol de colorație cu Safranin O pentru cartilaj

NovaUltra Special Stain Kits

Descriere: Această metodă este utilizată pentru detectarea cartilajului, a mucinei și a granulelor de mastocite pe secțiuni de țesut fixate în formol și încorporate în parafină și poate fi utilizată și pentru secțiuni congelate. Cartilajul și mucina vor fi colorate în portocaliu spre roșu, iar nucleii vor fi colorați în negru. Fundalul se colorează în verde albăstrui.

Fixare: Secțiuni fixate cu formalină, incluse în parafină.

Soluții și reactivi:

Soluție de hematoxilină cu fier de Weigert:

Soluție stoc A:

Hematoxilină —————————– 1 g

Alcool 95% —————————– 100 ml

Soluție stoc B:

:

29% clorură ferică în apă ———– 4 ml

Apă distilată ————————– 95 ml

Acid clorhidric, concentrat —- 1ml

Hematoxilină de fier Weigert Soluție de lucru:

Hematoxilină de fier:

Se amestecă părți egale din soluția stoc A și B. Această soluție de lucru este stabilă timp de aproximativ 4 săptămâni.

Soluție Fast Green (FCF) 0,05%:

Fast green, FCF, C.I. 42053 ————- 0,5 g

Apă distilată —————————- 1000 ml

Soluție de acid acetic 1%:

Acid acetic, glacial ————————- 1 ml

Apă distilată —————————— 99 ml

Soluție de Safranin O 0,1%:

Safranin O, C.I. 50240 ——————– 0,1 g

Apă distilată —————————– 100 ml

Procedură:

1. Se deparafinizează și se hidratează lamelele în apă distilată.

2. Se colorează cu soluția de lucru Weigert’s iron hematoxilină timp de 10 minute.

3. Se spală în apă curentă de la robinet timp de 10 minute.

4. Se colorează cu soluție verde rapid (FCF) timp de 5 minute.

5. Clătiți rapid cu soluție de acid acetic 1% timp de cel mult 10 -15 secunde.

6. Colorați cu soluție de safranină O 0,1% timp de 5 minute.

7. Se deshidratează și se limpezesc cu alcool etilic 95%, alcool etilic absolut și xilen, folosind câte 2 schimburi de câte 2 minute fiecare.

8. Se montează folosind mediu rășinos.

Rezultate:

:

Nuclee: ———————————————- negru

Citoplasmă —————————————– verde albăstrui

Cartilaj, mucină, granule de mastocite ———– portocaliu spre roșu

Căutați imagini

3. Camplejohn KL, Allard SA. Limitări ale colorației cu safranină ‘O’ în cartilajul sărăcit de proteoglicani demonstrate cu anticorpi monoclonali. histochimie. 1988;89(2):185-8. PubMed Abstract

.