Safranin O Staining Protocol for Cartilage

NovaUltra Special Stain Kits

Beschrijving: Deze methode wordt gebruikt voor de detectie van kraakbeen, mucine, en mestcelgranules op formaline-vaste, paraffine-ingebedde weefselsecties, en kan ook worden gebruikt voor bevroren secties. Het kraakbeen en de mucine worden oranje tot rood gekleurd, en de kernen worden zwart gekleurd. De achtergrond is blauwachtig groen gekleurd.

Fixatie: Formalinefixeerde, in paraffine ingebedde coupes.

Oplossingen en reagentia:

Weigert’s IJzer Hematoxyline Oplossing:

Stockoplossing A:

Hematoxyline —————————– 1 g

95% Alcohol —————————– 100 ml

Stockoplossing B:

29% ijzerchloride in water ———– 4 ml

Gedestilleerd water ————————– 95 ml

Zoutzuur, geconcentreerd —- 1 ml

Weigert’s IJzer Hematoxyline Werkoplossing:

Meng gelijke delen van voorraadoplossing A en B. Deze werkoplossing is ongeveer 4 weken stabiel.

0,05% Fast Green (FCF) oplossing:

Snelgroen, FCF, C.I. 42053 ————- 0,5 g

Gedestilleerd water —————————- 1000 ml

1% Azijnzuur-oplossing:

Azijnzuur, ijsvormig ————————- 1 ml

Gedestilleerd water —————————— 99 ml

0,1% Safranin O-oplossing:

Safranin O, C.I. 50240 ——————– 0,1 g

Gedestilleerd water —————————– 100 ml

Procedure:

1. Deparaffineer en hydrateer de draagglaasjes met gedestilleerd water.

2. Kleur gedurende 10 minuten met Weigert’s ijzerhematoxyline werkoplossing.

3. Was in stromend kraanwater gedurende 10 minuten.

4. Vlekken met een snelle groene oplossing (FCF) gedurende 5 minuten.

5. Spoel snel met een 1% azijnzuuroplossing gedurende niet meer dan 10 -15 seconden.

6. Vlekken in 0,1% safranine O-oplossing gedurende 5 minuten.

7. Dehydrateer en klaar met 95% ethylalcohol, absolute ethylalcohol, en xyleen, telkens 2 keer, telkens 2 minuten.

8. Monteren met een harsachtig medium.

Resultaten:

Nuclei ———————————————- zwart

Cytoplasma —————————————– blauwachtig groen

Kraakbeen, mucine, mestcelgranula ———– oranje tot rood

Vind afbeeldingen

3. Camplejohn KL, Allard SA. Limitations of safranin ‘O’ staining in proteoglycan-depleted cartilage demonstrated with monoclonal antibodies.Histochemistry. 1988;89(2):185-8. PubMed Abstract