Safranin O Staining Protocol for Cartilage

NovaUltra Special Stain Kits

説明文。 本法はホルマリン固定、パラフィン包埋組織切片の軟骨、ムチン、肥満細胞顆粒の検出に使用します。また、凍結切片にも使用できます。 軟骨とムチンは橙～赤に、核は黒に染色されます。 背景は青緑色に染色されます。

Fixation: ホルマリン固定、パラフィン包埋切片。

溶液と試薬。

Weigert’s Iron Hematoxylin Solution:

ストック液A：

Hematoxylin —————————– 1 g

95% Alcohol —————————– 100 ml

Stock Solution B：

ヘマトキシリン溶液。

29% 塩化第二鉄水溶液 ———– 4 ml

蒸留水 ————————– 95 ml

濃塩酸 —- 1 ml

ワイガート鉄ヘマトキシリン作業溶液:

原液AとBを等量ずつ混合し、4週間程度安定に保存できる。

0.05% Fast Green (FCF) Solution:

Fast green, FCF, C.I. 42053 ————- 0.5 g

蒸留水 —————————– 1000 ml

1% Acetic Acid Solution:

酢酸、氷水 ————————- 1 ml

蒸留水 —————————— 99 ml

0.1% Safranin O溶液.酢酸、氷水 ————————- 1 ml

蒸留水 —————————— 99 ml

Safranin O, C.I. 50240 ——————– 0.1 g

蒸留水 —————————– 100 ml

手順：

1. スライドを脱パラフィンし、蒸留水に水和させます。

2. Weigertの鉄ヘマトキシリン作業溶液で10分間染色します。

3.水道水の流水で10分間洗浄します。

4.ファストグリーン（FCF）液で5分間染色します。

5. 1%酢酸溶液で10～15秒以内に素早くすすぎます。

6. 0.1%サフラニンO溶液で5分間染色します。

7. 95%エチルアルコール、絶対エチルアルコール、キシレンで2回ずつ、2分間ずつ脱水清澄する。

8.樹脂培地を用いてマウントする。

結果を報告します。

核 —————————— 黒

細胞質 —————————— 青緑色

軟骨, ムチン、肥満細胞顆粒 ———– オレンジ～赤

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3. Camplejohn KL, Allard SA. プロテオグリカン欠乏軟骨におけるサフラニン’O’染色の限界はモノクローナル抗体で実証された。 1988;89(2):185-8. PubMed Abstract