Protocole de coloration au Safranin O pour le cartilage

Kits de coloration spéciale NovaUltra

Description : Cette méthode est utilisée pour la détection du cartilage, de la mucine et des granules de mastocytes sur des coupes de tissus fixés au formol et inclus en paraffine, et peut également être utilisée pour les coupes congelées. Le cartilage et la mucine seront colorés en orange à rouge, et les noyaux seront colorés en noir. Le fond est coloré en vert bleuté.

Fixation : Sections fixées au formol et incluses dans la paraffine.

Solutions et réactifs :

Solution d’hématoxyline de fer de Weigert :

Solution mère A :

Hématoxyline —————————– 1 g

Alcool à 95% —————————– 100 ml

Solution mère B :

Chlorure ferrique à 29% dans l’eau ———– 4 ml

Eau distillée ————————– 95 ml

Acide chlorhydrique concentré —- 1ml

Solution de travail d’hématoxyline ferrique de Weigert :

Mélanger à parts égales les solutions mères A et B. Cette solution de travail est stable pendant environ 4 semaines.

Solution de vert rapide (FCF) à 0,05% :

Vert rapide, FCF, C.I. 42053 ————- 0,5 g

Eau distillée —————————- 1000 ml

Solution d’acide acétique à 1% :

Acide acétique, glacial ————————- 1 ml

Eau distillée —————————— 99 ml

0,1% Solution de Safranin O :

Safranin O, C.I. 50240 ——————– 0,1 g

Eau distillée —————————– 100 ml

Procédure:

1. Déparaffiniser et hydrater les lames à l’eau distillée.

2. colorer avec la solution de travail d’hématoxyline de fer de Weigert pendant 10 minutes.

3. lavage à l’eau courante du robinet pendant 10 minutes.

4. coloration avec une solution de vert rapide (FCF) pendant 5 minutes.

5. Rincer rapidement avec une solution d’acide acétique à 1% pendant pas plus de 10 -15 secondes.

6. coloration dans une solution de safranine O à 0,1% pendant 5 minutes.

7. déshydrater et éclaircir avec de l’alcool éthylique à 95%, de l’alcool éthylique absolu et du xylène, en utilisant 2 changements chacun, 2 minutes chacun.

8. monter en utilisant un milieu résineux.

Résultats :

Noyaux ———————————————- noir

Cytoplasme —————————————– vert bleuté

Cartilage, mucine, granules de mastocytes ———– orange à rouge

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3. Camplejohn KL, Allard SA. Limites de la coloration à la safranine ‘O’ dans le cartilage appauvri en protéoglycanes démontrées par des anticorps monoclonaux.Histochimie. 1988;89(2):185-8. PubMed Abstract

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