Protokol til farvning af brusk med Safranin O

NovaUltra Special Stain Kits

Beskrivelse: Denne metode anvendes til påvisning af brusk, mucin og mastcellegranulat på formalinfikserede, paraffinindlejrede vævssnit, og kan også anvendes til frosne snit. Brusk og mucin bliver farvet orange til rødt, og kerner bliver farvet sort. Baggrunden farves blåligt grøn.

Fixering: Formalinfikserede, paraffinindlejrede sektioner.

Løsninger og reagenser:

Weigert’s Iron Hematoxylin Solution:

Weigert’s Iron Hematoxylin Solution:

Stamopløsning A:

Hæmatoxylin —————————– 1 g

95% alkohol —————————– 100 ml

Stamopløsning B:

Stamopløsning B:

29% jern(III)chlorid i vand ———– 4 ml

destilleret vand ————————– 95 ml

saltsyre, koncentreret —- 1 ml

Weigert’s Iron Hematoxylin Arbejdsopløsning:

Bland lige dele af stamopløsning A og B. Denne arbejdsopløsning er stabil i ca. 4 uger.

0,05% Fast Green (FCF) opløsning:

Fast green, FCF, C.I. 42053 ————- 0,5 g

Destilleret vand —————————- 1000 ml

1% eddikesyreopløsning:

Iseddikesyre ————————- 1 ml

Destilleret vand —————————— 99 ml

0,1% Safranin O Opløsning:

Safranin O, C.I. 50240 ——————– 0,1 g

Destilleret vand —————————– 100 ml

Procedure:

1. Deparaffinering og hydrering af objektglas i destilleret vand.

2. Farvning med Weigert’s jernhæmatoxylin-arbejdsopløsning i 10 minutter.

3. Vask i rindende ledningsvand i 10 minutter.

4. Farvning med hurtig grøn (FCF) opløsning i 5 minutter.

5. Skyl hurtigt med 1 % eddikesyreopløsning i højst 10 -15 sekunder.

6. Farvning i 0,1 % safranin O-opløsning i 5 minutter.

7. Dehydreres og klares med 95 % ethylalkohol, absolut ethylalkohol og xylen ved 2 skift af hver i 2 minutter.

8. Monteres ved hjælp af harpiksholdigt medium.

Resultater:

Kerner ———————————————- sort

Cytoplasma —————————————– blåligt grønt

Brusk, mucin, mastcellegranulat ———– orange til rødt

Find billeder

3. Camplejohn KL, Allard SA. Limitations of safranin ‘O’ staining in proteoglycan-depleted cartilage demonstrated with monoclonal antibodies. histochemistry. 1988;89(2):185-8. PubMed Abstract