Protokol barvení chrupavky safraninem O

Soupravy pro speciální barvení NovaUltra

Popis: Tato metoda se používá k detekci chrupavky, mucinu a granulí žírných buněk na formalínem fixovaných, do parafínu vložených řezech tkání a lze ji použít i pro zmrazené řezy. Chrupavka a mucin se zbarví oranžově až červeně a jádra se zbarví černě. Pozadí se obarví modrozeleně.

Fixace:

Roztoky a činidla: Formalinem fixované, do parafínu zalité řezy:

Roztok Weigertova železitého hematoxylinu:

Základní roztok A:

Hematoxylin —————————– 1 g

95% alkohol —————————– 100 ml

Základní roztok B:

29% chlorid železitý ve vodě ———– 4 ml

destilovaná voda ————————– 95 ml

kyselina chlorovodíková, koncentrovaná —- 1ml

pracovní roztok Weigertova hematoxylinu železa:

Smíchejte stejné díly základního roztoku A a B. Tento pracovní roztok je stabilní asi 4 týdny.

0,05% roztok Fast Green (FCF):

Fast green, FCF, C.I. 42053 ————- 0,5 g

Destilovaná voda —————————- 1000 ml

1% roztok kyseliny octové:

Kyselina octová, ledová ————————- 1 ml

Destilovaná voda —————————— 99 ml

0,1% roztok safraninu O:

Safranin O, C.I. 50240 ——————– 0,1 g

Destilovaná voda —————————– 100 ml

Postup:

1. Deparafinujte a hydratujte sklíčka do destilované vody.

2. Obarvíme pracovním roztokem Weigertova železitého hematoxylinu po dobu 10 minut.

3. Promývejte v tekoucí vodovodní vodě po dobu 10 minut.

4. Obarvení roztokem rychlé zelené (FCF) po dobu 5 minut.

5. Rychle opláchněte 1% roztokem kyseliny octové po dobu nejvýše 10 -15 sekund.

6. Barvěte v 0,1% roztoku safraninu O po dobu 5 minut.

7. Odvlhčete a vyčistěte 95% etylalkoholem, absolutním etylalkoholem a xylenem za použití 2 výměn po 2 minutách.

8. Připevněte pomocí pryskyřičného média.

Výsledky:

Jádra ———————————————- černá

Cytoplazma —————————————– modrozelená

Chrupavka, mucin, granule žírných buněk ———– oranžová až červená

Vyhledat obrázky

3. Camplejohn KL, Allard SA. Omezení barvení safraninem „O“ v proteoglykanem ochuzené chrupavce prokázaná pomocí monoklonálních protilátek. histochemistry. 1988;89(2):185-8. PubMed Abstract

.