Como especialistas na área de coleta de amostras de saliva, entendemos que ter amostras de DNA de saliva otimizadas para garantir os melhores resultados possíveis é crucial para seu estudo de pesquisa.

O alto rendimento e a alta qualidade do DNA de saliva permite que nossos clientes realizem mais estudos e gerem mais dados, acelerando assim suas pesquisas. Além disso, ter opções de coleta não invasivas, como Oragene, fornece aos pesquisadores e participantes um método de coleta que eles realmente gostam.

Achamos que seria útil destacar dicas e truques comprovados para otimizar suas amostras. Sabemos o que é preciso para obter excelentes resultados com amostras de saliva e temos anos de experiência para apoiar isso.

Compilámos as nossas 10 melhores formas de optimizar amostras de saliva de ADN que podem contribuir para o seu sucesso. Enquanto estiver a ler, pergunte-se se alguma destas dicas pode ser útil no seu laboratório. E se você tiver dicas adicionais para compartilhar, nos informe no Twitter, Linkedin ou em nossa página do Facebook.

Otimização baseada em coleta

1. É importante seguir de perto as instruções de coleta. Certifique-se de que os sujeitos entregam a quantidade necessária de saliva e não coma/ beba/ fume/fume/chew gumble por 30 minutos antes de dar uma amostra. O não cumprimento destas recomendações pode resultar numa redução da produção de ADN.
2. Ao cuspir, as bolhas de ar não contam. Certifique-se de que a saliva líquida está na linha ‘Fill To’; quaisquer bolhas presentes devem estar acima da linha. Isto irá garantir que a quantidade ideal de saliva é recolhida. Se você coletar menos saliva, a qualidade não é afetada, mas a produção de DNA será reduzida proporcionalmente.
3. A produção de DNA variará entre os doadores. É importante testar amostras de diferentes doadores para obter uma imagem precisa dos rendimentos que você pode esperar.
4. Para doadores com problemas para cuspir 2 ml, o fluxo de saliva pode muitas vezes ser estimulado esfregando as bochechas, logo atrás dos dentes de trás. Você também pode estimular a produção de saliva usando uma pitada de açúcar na língua. Você só precisa de uma pequena quantidade; apenas o suficiente para que a pessoa possa saboreá-la. Uma gota de suco de limão também funciona.
5. Por vezes pode ser difícil recolher de uma pessoa incapaz de cuspir sob comando, tal como uma criança mais nova. Usando um kit de coleta projetado para não cuspir, como a coleta assistida pelo Oragene (OG-675) ou ORAcollect para pediatria (OC-175), facilitará a coleta de amostras tanto para você quanto para o doador e garantirá que você colete DNA suficiente.

Optimização baseada em processamento

1. A etapa de incubação a 50°C deve ser realizada no tubo de amostra original, antes de remover uma alíquota para a extração do DNA. A incubação só precisa ser feita uma vez; não é necessário repetir esta etapa ao extrair o ADN das alíquotas subsequentes.

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2. As etapas específicas para a remoção do RNA não são tomadas, o RNA irá co-purificar com o ADN. Recomendamos quantificar o seu ADN por fluorescência (por exemplo, Picogreen) uma vez que a absorvância UV pode sobrestimar a quantidade de ADN.
3. Se a sua aplicação a jusante requer concentrações elevadas de ADN, pode aumentar a concentração reduzindo a quantidade de tampão utilizado para dissolver o sedimento de ADN de 100 µL para 50 µL. É sempre mais fácil diluir o ADN mais tarde em vez de ter de o concentrar.
4. As amostras de Oragene/saliva são estáveis à temperatura ambiente durante anos. Se não for possível extraí-las imediatamente, não há necessidade de refrigerá-las ou congelá-las; basta deixá-las na bancada.
5. Certifique-se de que tem tempo suficiente para o ADN se dissolver após a extracção. O DNA extraído de amostras de Oragene/saliva utilizando o método prepIT-L2P tem um peso molecular extremamente alto e, portanto, levará tempo para dissolver completamente. Após a extracção, recomendamos deixar a amostra à temperatura ambiente durante a noite para permitir que o ADN se dissolva completamente. A não dissolução completa do DNA pode afetar a precisão da quantificação.

Estas são as nossas 10 principais formas de otimizar as amostras de DNA. Você tem algo a acrescentar à lista? Por favor, deixe um comentário e nos informe.

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