Abstract

Tragically, genital tract infections are still a major public health problem in many regions.そのため，性器感染症は多くの地域で問題となっている． 本研究は，ドバイのイラン病院を受診した既婚女性における，単純ヘルペスウイルス（HSV），クラミジア・トラコマティス（CT），淋菌（NG）の子宮頸部感染症の有病率を明らかにするために実施された。 2010年にUAEのドバイにあるIranian Hospitalの産科婦人科に紹介された16歳から80歳の女性患者201人を対象としたレトロスペクティブ横断的調査である。 患者は15～30歳（I群）、31～40歳（II群）、41歳（III群）の3つの年齢群に分類された。 各女性から子宮頸部スワブサンプルを採取し，PCR法によりHSV，CT，NGの子宮頸部感染有病率を測定した． HSV，CT，NGはそれぞれ6.5％，10.4％，5.5％のスワブサンプルで検出された． 年齢別では，NGとHSVの有病率はI群とIII群で有意差が認められた． 性感染症（STD）の公衆衛生上の重要性，生活の質に対する長期的な影響，経済的負担から，予防対策と女性への教育が必要であると考えられた。 はじめに

悲劇的なことに、性器感染症は多くの地域でいまだに主要な公衆衛生問題である。 米国では毎年、1500万人以上の性感染症（STD）の新規症例が報告されています。 女性の場合、そのうちのいくつかは、長期にわたる骨盤内炎症性疾患、不妊症、子宮外妊娠、性交疼痛症、子宮頸がんにつながる可能性があります。 毎年、STD の新規感染者の半数以上は、15 歳から 24 歳の若い世代で発生している。 さらに、若い女性や思春期の女性では、うつ病、社会的支援の低下、顕著なストレスの原因となることがある。

単純ヘルペスウイルス（HSV）、クラミジア・トラコマティス（CT）、淋菌（NG）などの性病の大部分は、女性では無症状であることが示されている … 性器ヘルペスは、一般的に先進国および発展途上国の両方において、かなりの罹患率を伴う一般的な慢性STDと考えられている。 この感染症は、HSV-2（主に）とHSV-1（時々）の2種類のウイルスによって引き起こされ、その有病率と発生率は過去30年間に増加しています。

CT 感染は、特に若い女性で、世界で最も頻繁に起こる細菌性STD の原因です。 淋病はNGが原因であり、この病原体は、特に未治療の患者において、頻繁に使用される抗菌剤に対して耐性を獲得する可能性があることが実証された。 これらの症例は感染し続け、抗菌薬耐性の急速な出現を促進する可能性がある 。 本疾患は罹患率が高いため、症候性・無症候性感染の診断が非常に重要である。

近年、性病のスクリーニング方法として、迅速検出キットやディップスティックが一般的で便利、かつ迅速に使用されている。 しかし、PCR法、qualitative and quantitative real time PCR法、DNA hybridization法などの新しい分子法が、血清法に比べてより信頼性の高い手法として、さまざまなSTDの診断に導入された。 また、体液中の病原体のDNA量をモニタリングすることで、病気の状態、薬に対する反応、耐性パターンを明らかにすることが可能である

UAE のドバイでは、個人のライフスタイルが変化している。 また、アジア、アフリカ、ヨーロッパなど100カ国以上から多くの出稼ぎ労働者や投資家がこの都市に集まっている。 ドバイは世界で8番目に観光客が訪れる都市であり、2015年まで様々な国から1,500万人以上の観光客が訪れていることが示されており、STDはUAEのドバイにおける新たな公衆衛生上の関心事となり得る。 ドバイの人々におけるSTDのスクリーニングは、公衆衛生問題を管理するための最初の、そして非常に重要なステップとなる可能性があります。 本研究の目的は、ドバイのイラン病院を受診した既婚女性におけるHSV、CT、NGの子宮頸部感染の有病率を明らかにすることである。 対象と方法

2.1. 研究対象者

2010年に性器のかゆみ、性交疼痛症、排尿障害、膣分泌物の異常などの症状でドバイのIranian Hospitalの産科婦人科に紹介された16-80歳（年）の女性患者201名が対象となった。 患者の国籍は様々であり（表1）、全員が既婚者であった。 患者は3つの年齢群に分類された：15〜30歳（I群），31〜40歳（II群），41歳以上（III群）であった。 すべての患者から子宮頸部スワブサンプルを無菌スワブで採取し、さらなる調査のためにイラン、シラーズのNemazee病院、Alborzi教授臨床微生物学研究センターにウイルス輸送媒体で移送された。 この研究は、ドバイのイラン病院の教育研究室にて承認された。

2.2. DNA抽出

DNA は、Invisorb spin virus DNA Mini Kit (Invitek, Berlin, Germany) により、200μL のウイルス輸送培地で綿棒試料から製造者のプロトコールに従って抽出された。 CTの検出には、溶解バッファーキットに付属の標準量の内部コントロールDNAを加え、抽出効率をモニターした。 ネガティブコントロールとポジティブコントロールは、抽出工程に含まれた。

2.3. リアルタイム定量PCRによるHSVおよびCTの検出

リアルタイム定量PCRは、先に報告したように、HSV1およびHSV2の糖タンパク質B（gB）の領域に特異的なオリゴヌクレオチドプライマー対とプローブを用いて実施した. プライマーはHSVFP (5′TCC CGG TAC GAA GAC CAG3′) とHSVRP (5′AGC AGG CCG CTG TCC TTG3′), プローブはHSVTCP (5′FAMTGG TCC AGC ATG GTG TTG/C AGG TCGTAMRA3′) であった。 反応は以下のプロトコルで行った：AmpErase活性化のため50℃で2分間インキュベート、ポリメラーゼ活性化のため95℃で10分間、45サイクル、変性は94℃で15秒、アニーリング、伸長、データ収集は58℃で60秒。 各50μLのPCR混合物には、10μLの精製DNA、840nM濃度の各プライマー、および100nMのプローブが1x TaqMan universal PCR master mix (Applied Biosystems, Branchburg, New Jersey, USA) に含まれていた。

CTの検出には、CTゲノムに特異的なプライマー対とプローブを使ってAdvanced Kit (PrimerDesign Ltd. Millbrook Technology Campus, South Hampton, UK) でリアルタイム定量PCRが実行された。 増幅はTaqMan universal real time PCR master mix reagents (Roche, Branchburg, New Jersey, USA) を用いて行った． AmpErase活性化のために50℃で2分間、ポリメラーゼ活性化のために95℃で10分間、そして45サイクル、変性は95℃で10秒、アニーリング、伸長、データ収集は60℃で60秒という4段階のプロトコルで行った。

すべての増幅はApplied Biosystem Sequence Detector 7500 machine (Applied Biosystems、アメリカ)で行われた。 ネガティブコントロールは、20の臨床サンプルごとに抽出プロセスに含まれた。 陰性サンプルはすべて2回検査した。

2.4. NGの検出

NGの検出は、PCR検出キット（CinnaGen Inc.、イラン）を用いて、メーカーのプロトコルにしたがって実施した。 反応混合物を94℃で3分間加熱した後、94℃45秒、50℃20秒、72℃30秒を35サイクル、さらに72℃で5分間インキュベートして伸長させた。 PCR産物は1％アガロースゲルで分析した。

2.5. 統計解析＜3040＞＜6832＞年齢層によるHSV、CT、NGの有病率の差はカイ二乗検定で解析した。 さらに，HSV，CT，NGと真菌性子宮頸部感染症の発生との関連をカイ二乗検定により解析した。 全データはSPSSソフトウェア（SPSS for Windows, version 16, SPSS Inc.） 結果

Candida spp.とCoccobacilli cervical infectionは真菌-細菌感染として45.3%の有病率と非真菌-細菌感染として54.7%の有病率とされた． HSVおよびCTはそれぞれ13（6.5％）および21（10.4％）のスワブサンプルで陽性であった． real time PCR法で測定したHSV DNAのコピー数はウイルス輸送媒体中で3.11 × 103～7.18 × 105 copies/mL（中央値4 × 104 copies/mL），CT DNAのコピー数はウイルス輸送媒体中で3.48 × 103～7.11 × 106 copies/mL（中央値3.33 × 105 copies/mL）の範囲であった． NGは11例（5.5％）で検出された。

表2に各年齢層における有病率を示した。 混合感染している患者はいなかった。 CTの有病率は各年齢層で有意差はなかった()。 NGとHSVの有病率はI群とII群，II群とIII群で有意差はなかったが（），I群とIII群では有意差があった。 さらに，HSV，CT，NGの有病率は，真菌・細菌性子宮頸管感染症群と非真菌・細菌性子宮頸管感染症群の間で統計的に有意な差はなかった()． 表3は，HSV，CT，NGの有病率について，UAEのドバイにおける我々のデータを異なる研究結果と比較したものである。

4. 考察

今回の研究では、女性201人のうち、HSV、CT、NGに感染していたのはそれぞれ6.5%、10.4%、5.5%であった。 HSV、CT、NGの感染に関する今回の知見は、STDの有病率に関する過去の調査と一致している。 最近，米国で行われた同様の調査では，女性509人のうち7％にHSV-2のDNAが検出された． トルコでの先行研究では、低リスクの女性の12.7％がCTに感染していた. Gaydosらは，調査した女性集団の3.8％がNGに感染していると報告した。

これまでの文献によると，HSV，CT，NG感染の大部分は無症状で，長期に渡って継続する可能性がある。 同様に、本研究でも、検診を受ける前に自分の感染に気づいていた女性はいなかったが、いくつかの臨床症状は確認されていた。 STDの有病率は、リスクが低いとされる集団に比べ、高リスクの集団で一貫して高いことがわかった。 STDに関連する危険因子としてよく挙げられるのは、未婚であること、複数の性的パートナーがいることなどである 。 オランダのアムステルダムでは、HSV-1またはHSV-2の有病率は最も若い年齢層に多く、10代と20代の成人の有病率はそれぞれ5.26％と4.31％であった …………………..。 ペルーでは，女性のCT感染の有病率は6～5％，NG感染の有病率は0～1％であった． 韓国では，CTの検出率は2.4％，HSV II型の検出率は0.8％であった． チュニジアの女性セックスワーカーでは、CT、NG、HSV-2 PCRがそれぞれ72.9%、11.2%、1.1%で陽性となった。

先行研究では、若年がCT陽性となることが示されているが、年齢と有病率との相関がないと報告する調査もある …。 同様に、我々の調査結果では、異なる年齢層間でCTの有病率に有意差はなかった。

様々な研究により、ほとんどの地理的地域でHSV有病率は一貫して年齢とともに増加することが示された。 バングラデシュにおける同様の研究では，20歳未満の既婚女性におけるHSV-2抗体の陽性率は低いことが明らかにされた． 一方、今回の調査では、NGの有病率は年齢とともに減少し、I群とIII群では有病率に有意差があり、若い女性でより多く感染していることが明らかにされた。 この結果は，別の研究と矛盾している。 ナイジェリアでは、NG感染は25歳の女性でより一般的であった。

中国の女性セックスワーカーの研究では、調査集団の8％がNGに感染しており、これは若い女性の感染率に近いものであった。 本研究の対象者は全員既婚者であり、家族以外との性交渉はなかったが、これらの患者のSTDの有病率は高率であった。 しかし、パートナーの性的関係を評価する必要がある。 フランスでの以前の調査では、不妊症カップルの無症状男性パートナー111人のうち、CTがPCR COBAS AMPLICORと血清検査でそれぞれ6.3％と4.5％に検出されたことが示されている . 真菌・細菌性子宮頸管感染症は45.3％に認められたが，HSV，CT，NGの有病率は真菌・細菌性子宮頸管感染症と非真菌性子宮頸管感染症の間で有意差はなかった． 以上のことから，HSV，CT，NG，T. vaginalisなど，細菌性および真菌性の膣炎とSTDの混合感染が起こりうることが示された． 今後，HSV，CT，NG，その他のSTDの発症における細菌および真菌の子宮頸部感染の役割を包括的に検討する必要がある． 国民、特に若年層におけるSTDの有病率および発症率を監視することは、政府当局による予防戦略および努力の実施と評価に役立つであろう。 STDが生活の質に与える影響は大きく、長期にわたるため、また、高い医療費による経済的損失があるため、世界中でSTDを正確に評価する必要がある。 Jermanらの報告によると、2005年にカリフォルニア州で新たに発生したSTDの患者数は110万人で、その直接医療費は11億USドルであった 。 さらに、症状のある性病は氷山の一角に過ぎず、これらの疾患のほとんどは無症状である。 したがって、STDのスクリーニング・プログラムは、STDの感染を予防し、科学者が新しい治療プロトコルを計画するために、すべての国で重要である。

Conflict of Interests

The authors declare that is no conflict of interests regarding the publication of this paper.

Acknowledgement

The authors appreciate the Iranian Hospital cooperation especially the departments of Pathology and Obstetrics and Gynecology.

The doctors of the STDs in the Public Health Important for STDs, and education of women seem necessary.Concluding of STDs of the Public Health in the STDs in the STDs, and more.