Protocollo di colorazione con Safranin O per cartilagine

Kit di colorazione speciale NovaUltra

Descrizione: Questo metodo è utilizzato per il rilevamento di cartilagine, mucina e granuli di mastociti su sezioni di tessuto fissate in formalina e incluse in paraffina e può essere utilizzato anche per sezioni congelate. La cartilagine e la mucina saranno colorate da arancione a rosso e i nuclei saranno colorati di nero. Lo sfondo è colorato di verde bluastro.

Fissazione: Sezioni fissate in formalina, incluse in paraffina.

Soluzioni e reagenti:

Soluzione di ematossilina di ferro di Weigert:

Soluzione Stock A:

Ematossilina —————————– 1 g

Alcool 95% —————————– 100 ml

Soluzione Stock B:

Cloruro ferrico al 29% in acqua ———– 4 ml

Acqua distillata ————————– 95 ml

Acido cloridrico, concentrato —- 1ml

Ematossilina di ferro di Weigert Soluzione di lavoro:

Mescolare parti uguali di soluzione stock A e B. Questa soluzione di lavoro è stabile per circa 4 settimane.

Soluzione 0,05% di Fast Green (FCF):

Verde veloce, FCF, C.I. 42053 ————- 0,5 g

Acqua distillata —————————- 1000 ml

1% di soluzione di acido acetico:

Acido acetico, glaciale ————————- 1 ml

Acqua distillata —————————— 99 ml

0,1% Safranin O Solution:

Safranin O, C.I. 50240 ——————– 0.1 g

Acqua distillata —————————– 100 ml

Procedura:

1. Deparaffinizzare e idratare i vetrini in acqua distillata.

2. Colorare con la soluzione di ematossilina di Weigert per 10 minuti.

3. Lavare in acqua corrente di rubinetto per 10 minuti.

4. Colorare con soluzione di verde veloce (FCF) per 5 minuti.

5. Risciacquare rapidamente con una soluzione di acido acetico all’1% per non più di 10-15 secondi.

6. Colorare con soluzione di safranina O allo 0,1% per 5 minuti.

7. Disidratare e pulire con alcool etilico al 95%, alcool etilico assoluto e xilene, usando 2 cambi ciascuno, 2 minuti ciascuno.

8. Montare con mezzo resinoso.

Risultati:

Nuclei ———————————————- nero

Citoplasma —————————————– verde bluastro

Cartilagine, mucina, granuli di mastociti ———– arancione a rosso

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3. Camplejohn KL, Allard SA. Limiti della colorazione della safranina ‘O’ nella cartilagine impoverita di proteoglicani dimostrata con anticorpi monoclonali.Histochemistry. 1988;89(2):185-8. PubMed Abstract