Protocolo de tinción con Safranin O para cartílago

Kits de tinción especial NovaUltra

Descripción: Este método se utiliza para la detección de cartílago, mucina y gránulos de mastocitos en secciones de tejido fijadas con formalina e incluidas en parafina, y puede utilizarse también para secciones congeladas. El cartílago y la mucina se tiñen de naranja a rojo, y los núcleos se tiñen de negro. El fondo se tiñe de verde azulado.

Fijación: Secciones fijadas con formol e incluidas en parafina.

Soluciones y reactivos:

Solución de hematoxilina de hierro de Weigert:

Solución madre A:

Hematoxilina —————————– 1 g

Alcohol al 95% —————————– 100 ml

Solución madre B:

Cloruro férrico al 29% en agua ———– 4 ml

Agua destilada ————————– 95 ml

Ácido clorhídrico concentrado —- 1ml

Solución de trabajo de hematoxilina de hierro de Weigert:

Mezclar partes iguales de la solución madre A y B. Esta solución de trabajo es estable durante unas 4 semanas.

Solución Fast Green (FCF) al 0,05%:

Verde rápido, FCF, C.I. 42053 ————- 0,5 g

Agua destilada —————————- 1000 ml

Solución de ácido acético al 1%:

Ácido acético, glacial ————————- 1 ml

Agua destilada —————————— 99 ml

Solución de Safranin O al 0,1%:

Safranin O, C.I. 50240 ——————– 0,1 g

Agua destilada —————————– 100 ml

Procedimiento:

1. Desparafinar e hidratar los portaobjetos en agua destilada.

2. Teñir con solución de trabajo de hematoxilina de hierro de Weigert durante 10 minutos.

3. Lavar en agua corriente durante 10 minutos.

4. Teñir con solución verde rápida (FCF) durante 5 minutos.

5. Aclarar rápidamente con una solución de ácido acético al 1% durante no más de 10 -15 segundos.

6. Teñir en solución de safranina O al 0,1% durante 5 minutos.

7. Deshidratar y aclarar con alcohol etílico al 95%, alcohol etílico absoluto y xileno, utilizando 2 cambios de cada uno, 2 minutos cada uno.

8. Montar con medio resinoso.

Resultados:

Núcleos ———————————————- negro

Citoplasma —————————————– verde azulado

Cartílago, mucina, gránulos de mastocitos ———– naranja a rojo

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3. Camplejohn KL, Allard SA. Limitaciones de la tinción con safranina ‘O’ en el cartílago sin proteoglicanos demostradas con anticuerpos monoclonales.Histochemistry. 1988;89(2):185-8. PubMed Abstract