Som specialister på insamling av salivprover förstår vi att det är avgörande för din forskningsstudie att ha DNA-prover från saliv som är optimerade för att säkerställa bästa möjliga resultat.

Den höga avkastningen och högkvalitativa DNA:t från saliv gör det möjligt för våra kunder att utföra fler studier och generera mer data, och därmed påskynda sin forskning. Att ha icke-invasiva insamlingsalternativ som Oragene ger dessutom forskare och deltagare en insamlingsmetod som de faktiskt gillar.

Vi trodde att det skulle vara bra att lyfta fram beprövade tips och tricks för att optimera dina prover. Vi vet vad som krävs för att få bra resultat från salivprover och vi har många års erfarenhet som styrker detta.

Vi har sammanställt våra 10 bästa sätt att optimera DNA-salivprover som kan bidra till din framgång. Medan du läser, fråga dig själv om något av dessa tips kan vara användbart i ditt labb. Och om du har ytterligare tips att dela med dig av, låt oss veta det på Twitter, Linkedin eller på vår Facebook-sida.

Optimering baserad på insamling

1. Det är viktigt att följa insamlingsinstruktionerna noga. Se till att försökspersonerna levererar den erforderliga mängden saliv och att de inte äter/dricker/röker/tuggar tuggummi under 30 minuter innan de lämnar ett prov. Om dessa rekommendationer inte följs kan det leda till minskat DNA-utbyte.
2. När du spottar räknas inte bubblorna. Se till att den flytande saliven befinner sig vid linjen ”Fyll till”; eventuella bubblor som finns ska vara ovanför linjen. Detta säkerställer att den optimala mängden saliv samlas in. Om du samlar in mindre saliv påverkas inte kvaliteten, men DNA-avkastningen minskar proportionellt.
3. DNA-avkastningen varierar mellan olika givare. Det är viktigt att testa prover från olika givare för att få en korrekt bild av vilken avkastning du kan förvänta dig.
4. För givare som har problem med att spotta 2 ml kan salivflödet ofta stimuleras genom att gnugga kinderna, precis bakom baktänderna. Du kan också stimulera salivproduktionen genom att använda en nypa socker på tungan. Det räcker med en liten mängd, bara så mycket att personen kan smaka på det. En droppe citronsaft fungerar också.
5. Undertiden kan det vara svårt att hämta från en person som inte kan spotta på kommando, till exempel ett yngre barn. Om du använder ett insamlingskit som är avsett för personer som inte spottar, t.ex. Oragene assisted collection (OG-675) eller ORAcollect for pediatrics (OC-175), underlättar du insamlingen av prover för både dig och donatorn och ser till att du samlar in tillräckligt med DNA.

Processbaserad optimering

1. Inkubationssteget vid 50 °C måste utföras i det ursprungliga provröret innan du tar ut en alikvot för DNA-extraktion. Inkuberingen behöver bara göras en gång; du behöver inte upprepa detta steg när du extraherar DNA från efterföljande alikvots.
2. Om inte särskilda åtgärder vidtas för att avlägsna RNA kommer RNA att sampurifieras med DNA. Vi rekommenderar att du kvantifierar ditt DNA genom fluorescens (t.ex. Picogreen) eftersom UV-absorption kan överskatta mängden DNA.
3. Om din nedströmstillämpning kräver höga koncentrationer av DNA kan du öka koncentrationen genom att minska mängden buffert som används för att lösa upp DNA-pelletsen från 100 µl till 50 µl. Det är alltid lättare att späda ut DNA:t senare än att behöva koncentrera det.
4. Oragene/salivprover är stabila i rumstemperatur i flera år. Om du inte kan extrahera dem direkt behöver du inte kyla eller frysa dem; låt dem bara ligga på bänken.
5. Se till att det finns tillräckligt med tid för DNA att lösas upp efter extraktionen. DNA som extraherats från Oragene/salivprover med prepIT-L2P-metoden har extremt hög molekylvikt och kommer därför att ta tid på sig att lösas upp helt och hållet. Efter extraktionen rekommenderar vi att provet lämnas i rumstemperatur över natten så att DNA:t kan lösas upp helt och hållet. Om DNA:t inte löses upp helt kan det påverka kvantifieringens noggrannhet.

Detta är våra tio bästa sätt att optimera DNA-prover. Har du något att tillägga till listan? Lämna en kommentar och låt oss veta.

Klicka på knappen Begär kit nedan om du är intresserad av att begära kostnadsfria provkit från Oragene, eller så kan du skicka ett e-postmeddelande till oss på [email protected].

Relaterade bloggar:

Hur man utför storskalig insamling av DNA-prov för genetisk forskning – 10 viktiga överväganden

8 fakta som de flesta människor inte känner till om DNA från saliv

.