Ela era filha de um tal John Duff, e era casada com James Gilbert, ferreiro. Os Gilberts foram colonos pioneiros que desembarcaram nas margens do rio Yarra e montaram acampamento em 30 de agosto de 1835. A escuna Enterprize, de John Pascoe Fawkner, trouxe-os e a outros colonos de Launceston, Tasmânia, onde ela se casou com James aos 18 anos de idade.

O grupo inicial de desembarque incluía o capitão John Lancey, mestre marinheiro, líder do grupo de desembarque e representante de Fawkner; George Evans, construtor; os carpinteiros William Jackson e Robert Hay Marr; o lavrador Charles Wise; o ferreiro James Gilbert e sua esposa grávida, Mary; e Evan Evans, servo de George Evans.

Em 29 de dezembro de 1835 Mary deu à luz seu filho, James Melbourne Gilbert, o primeiro filho europeu nascido no novo distrito. Ela recebeu 500 acres (200 ha) de terra e um loteamento de cidade. Um busto em tamanho real de Mary Gilbert pode ser encontrado no Conservatório, nos Jardins Fitzroy. A escultura foi criada pela artista de Melbourne, Ailsa O’Connor (1921-1980).

A 30 de Abril de 1837, Mary deu à luz um segundo filho, Charles Phillip Gilbert, também pai do seu marido, James. De acordo com a transcrição de sua morte, dois outros filhos foram John e William.

Embora James (possivelmente mais tarde conhecido como John) Melbourne Gilbert não fosse conhecido por ter filhos, seu irmão mais novo Charles era conhecido por ter gerado pelo menos oito filhos para sua esposa Amelia, tanto em Victoria como em New South Wales.

Ela foi acidentalmente queimada até à morte num incêndio florestal em South Talbingo, Tumut River, New South Wales, a 20 de Fevereiro de 1878, e enterrada na Cumberland Range a 24 de Fevereiro desse ano.