Apontamento genético em células estaminais embrionárias

Potencialmente, através do processo de apontamento genético em células ES, qualquer manipulação genética desejada pode ser introduzida na linha germinal de camundongos. Seqüências genéticas específicas podem ser eliminadas constitutivamente ou condicionalmente (Knock-out), mutações específicas ou alterações de pares de base podem ser feitas precisamente dentro de um gene de interesse e os genes de repórter ou outros cassetes de expressão podem ser introduzidos em locais definidos dentro do genoma (Knock-in). As sequências murinas podem ser trocadas por sequências humanas usando esta tecnologia para gerar modelos humanizados de rato.

Esta técnica pode demorar até um ano de desenvolvimento, por isso é essencial investir um tempo considerável no início do projecto para assegurar que a tecnologia e a estratégia genética mais apropriadas sejam seleccionadas para o modelo requerido. O núcleo transgênico pode fornecer consultoria para estes tipos de decisão e é essencial que todos os projetos de direcionamento sejam discutidos em detalhes com o núcleo antes de começar o trabalho no laboratório.

Quando uma estratégia é decidida, um vetor de direcionamento é construído e uma estratégia robusta de triagem é concebida e testada para assegurar que a manipulação genômica necessária possa ser detectada no nível genômico. O vector alvo é então transformado em células ES e os clones recombinantes são rastreados para o evento de recombinação homólogo desejado. Estas células são então injectadas em embriões pré-implantados e os ratos quiméricos resultantes são utilizados para reproduzir a linha de ratos geneticamente modificados.

Service

É oferecido um serviço flexível que pode ser dividido nas fases específicas de desenvolvimento do modelo, dependendo dos recursos disponíveis.

Início do projeto – livre de encargos

• Consultoria com o grupo para abordar uma tecnologia apropriada para alcançar um modelo seguro e utilizável
• Processamento de bancos de dados de armadilhas genéticas para clones de células ES pré-existentes
• Processamento de recursos do consórcio Knock-out para vetores-alvo pré-existentes, Clones e modelos de células ES

Consultoria para a construção do vetor alvo – Livre de Carga

• Análise da seqüência genômica para identificar regiões que têm uma alta probabilidade de serem regiões homológicas utilizáveis para o alvo do gene
• Consultoria com o grupo para abordar a estratégia genética necessária para alcançar um seguro, modelo utilizável
• A construção do vector de selecção não é fornecida pelo núcleo, mas o núcleo pode ajudar com o fornecimento de cassetes e conselhos metodológicos
• Estabelecimento da estratégia de selecção não é fornecida pelo núcleo, mas o núcleo pode ajudar com o fornecimento de cassetes e metodologia conselho

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Apontamento do gene em células estaminais embrionárias

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• Transfecção do vector de alvo completo em células estaminais embrionárias
• Isolamento e armazenamento de pelo menos 192 clones de células recombinantes independentes
• Preparação do DNA e entrega de 96 placas de poços para rastreio
• Descongelamento, expansão de clones putativos positivos
• Preparação adicional de DNA de clones putativos positivos para triagem de confirmação
• Análise cariótipo dos clones alvo

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Injeção de clones de células ES

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• Injeção de células ES na injeção de embriões pré-implantação
• Geração e alojamento de quimeras por até 3 semanas.
• Recomendações para estratégia de criação