Géncélzás embrionális őssejtekben

A géncélzás ES-sejtekben történő eljárásával potenciálisan bármilyen kívánt genetikai manipuláció bevezethető az egerek csíravonalába. Konkrét génszekvenciákat lehet konstitutívan vagy feltételesen törölni (Knock-out), specifikus mutációkat vagy bázispár-módosításokat lehet pontosan elvégezni egy adott génen belül, és riportergéneket vagy más expressziós kazettákat lehet a genomon belül meghatározott helyekre bevezetni (Knock-in). E technológia segítségével az egérszekvenciákat emberi szekvenciákra lehet cserélni, hogy humanizált egérmodelleket hozzanak létre.

Ez a technika akár egy éves fejlesztési időt is igénybe vehet, ezért a projekt kezdetén jelentős időt kell fordítani annak biztosítására, hogy a kívánt modellhez a legmegfelelőbb technológiát és genetikai stratégiát válasszuk ki. A transzgenikus mag tanácsadást tud nyújtani az ilyen típusú döntésekhez, és alapvető fontosságú, hogy minden célzási projektet részletesen megvitassanak a maggal, mielőtt a munka megkezdődik a laboratóriumban.

Amikor a stratégia mellett döntöttek, megépítik a célvektort, és robusztus szűrési stratégiát dolgoznak ki és tesztelnek annak biztosítására, hogy a kívánt genomiális manipuláció genomiális szinten kimutatható legyen. A célvektort ezután ES-sejtekbe transzfektáljuk, és a rekombináns klónokat a kívánt homológ rekombinációs eseményre szűrjük. Ezeket a sejteket ezután preimplantációs embriókba injektálják, és az így kapott kiméra egereket a genetikailag módosított egérvonal tenyésztésére használják.

Szolgáltatás

A rendelkezésre álló erőforrásoktól függően a modellfejlesztés egyes szakaszaira lebontható, rugalmas szolgáltatást nyújtunk.

Projektindítás – térítésmentesen

• Tanácsadás a csoporttal a biztonságos, használható modell eléréséhez megfelelő technológiával kapcsolatban
• Géncsapda-adatbankok szűrése már meglévő ES-sejtklónok után
• Kock-out konzorciumi források szűrése már meglévő célvektorok után, ES sejtklónok és modellek

Tanácsadás a célvektorok építéséhez – díjmentesen

• Genomikai szekvenciaelemzés azon régiók azonosítására, amelyek nagy valószínűséggel felhasználható homológia régiók a géncélzáshoz
• Tanácsadás a csoporttal a biztonságos géncélzás eléréséhez szükséges genetikai stratégiával kapcsolatban, használható modell kialakításához
• A célzott vektor megépítését a mag nem biztosítja, de a mag segítséget nyújthat a kazetták és a módszertani tanácsadás biztosításában
• A szűrési stratégia kialakítását a mag nem biztosítja, de a mag segítséget nyújthat a kazetták és a módszertani tanácsadás biztosításában. tanácsadás

Géncélzás embrionális őssejtekben

• A kész célvektor transzfekciója embrionális őssejtekbe
• Minimum 192 független rekombináns sejtklón izolálása és tárolása
• DNS előkészítése és 96 lyukú lemezek szállítása a szűréshez
• Hűtés, feltételezett pozitív klónok expanziója
• Kiegészítő DNS-előkészítés feltételezett pozitív klónokból a megerősítő szűréshez
• A célzott klónok kariotípusának elemzése

ES-sejtklónok blasztociszta injekciója

• ES-sejtek injektálása preimplantációs embrió injekcióba
• Kimérák előállítása és elhelyezése legfeljebb 3 hétig.
• Javaslatok a tenyésztési stratégiához