Konsultera möjligheten av infektion med M pneumoniae hos patienter i alla åldrar som uppvisar infektioner i luftvägarna. Laboratorieutredningen bör fokusera på både den kliniska sjukdomen (t.ex. trakeobronchit vs pneumoni) och de många möjliga infektiösa etiologier som kan orsaka kliniskt likartade manifestationer. Omfattningen av laboratorieundersökningen bör också återspegla sjukdomens svårighetsgrad och om sjukdomen motiverar sjukhusvistelse.

I så många som hälften av alla fall av samhällsförvärvade pneumonier fastställs aldrig den mikrobiologiska etiologin, trots lämpliga laboratorieundersökningar. Den typiska milda sjukdomen som orsakas av M pneumoniae hos annars friska personer kanske inte motiverar en omfattande mikrobiologisk undersökning eftersom empirisk behandling med orala antimikrobiella medel kan täcka M pneumoniae och de flesta andra bakteriella agens som ger liknande sjukdomar.

Laboratorieanalys

Tjugofem procent av patienterna utvecklar leukocytos; resten har leukocytantal inom referensområdet.

Patienterna kan ha en förhöjd ESR.

Det cellulära svaret i sputum är mononukleärt, utan att några bakterier syns med Gramfärgning.

Omkring 75 % av patienterna har en kall agglutinintiter på minst 1:32 under den andra sjukdomsveckan, som försvinner efter 6-8 veckor. Detta är inte ett specifikt test för M pneumoniae-infektion, men ju högre kallagglutinintitern är (>1:64) hos en patient med samhällsförvärvad lunginflammation, desto större är sannolikheten att kallagglutininerna beror på M pneumoniae. Inga specifika avvikelser i lever- eller njurfunktionen är troliga.

För att bekräfta mykoplasmatisk luftvägsinfektion krävs odling, molekylärbaserade tester och/eller serologiska tester.

Kultur

Avseende prov från luftvägarna som lämpar sig för odling är bland annat svabbprover från halsen, sputum, luftrörsaspirat, bronkialsköljvätska, pleuravätska eller vävnad för lungbiopsi, beroende på patientens kliniska tillstånd.

Mykoplasmatiska organismer har krävande tillväxtkrav och är ofta svåra och långsamma att odla in vitro. Var noga med att vid provtagning inokulera i ett lämpligt transportmedium (t.ex. SP4-buljong eller universellt transportmedium), vid sängkanten när det är möjligt, och att inte tillåta uttorkning. Kliniker rekommenderar frysning vid -70 °C om proverna inte kan transporteras till det diagnostiska laboratoriet omedelbart efter insamlingen.

Växt i kultur är långsam, kräver 3 veckor eller längre i vissa fall, och kulturen är inte extremt känslig för att påvisa M pneumoniae-infektion. Odlingsmediet är ofta otillgängligt utom från specialiserade referenslaboratorier. Om odling försöks, bör alternativa förfaranden, inklusive serologi och/eller molekylärbaserade nukleinsyraamplifieringstester, också utföras.

Serologiska tester

Läkare använder oftast serologi för att bekräfta M pneumoniae-infektion även om dessa tester lider av betydande problem.

Många kliniker föredrar enzymlänkade immunosorbentanalyser framför de äldre, mindre känsliga komplementfixeringsanalyserna och de ospecifika kalla agglutininintitrarna. Dessa typer av tester är allmänt tillgängliga via kommersiella referenslaboratorier.

Då primärinfektion inte garanterar skyddande immunitet mot framtida infektioner och rester av immunglobulin G (IgG) kan finnas kvar från tidigare möten med organismen, har experter lanserat en stor drivkraft för att utveckla känsliga och specifika tester som kan skilja mellan akut och avlägsen infektion.

För att ställa en definitiv diagnos krävs serokonvertering som dokumenteras med hjälp av parade prov som tagits med 2-4 veckors mellanrum. Även om vissa forskare påstår att tester av immunoglobulin M (IgM) eller immunoglobulin A (IgA) med enkeltiter avslöjar aktuell infektion, kan IgM finnas kvar i upp till flera månader hos vissa personer, och många vuxna kan inte uppvisa ett påvisbart IgM-svar. Att förlita sig på ett enda serologiskt test kan därför vara kliniskt missvisande, och experter rekommenderar att diagnosen av akut infektion baseras på serokonversion som mäts samtidigt i tester för både IgM och IgG. Användning av serologi för diagnos av mykoplasmainfektion är giltig endast om patienten har en tillfredsställande förmåga hos det humorala immunsystemet att skapa ett antikroppssvar.

Snabba diagnostiska enzymlänkade immunosorbentanalyser

Ett av de viktigaste framstegen under de senaste åren för diagnos av M pneumoniae-infektioner i luftvägarna är utvecklingen av kvalitativa, snabba, membranbaserade enzymlänkade immunosorbentanalyser för enstaka prov som lätt kan anpassas till laboratoriet på primärvårdens mottagning.

Remel IgG/IgM Antibody Test System (Thermo-Fisher) mäter både IgG och IgM samtidigt.

Meridian ImmunoCard (Meridian Bioscience, Inc.) mäter endast IgM.

Läkare kan utföra båda testerna utan särskild expertis eller utrustning, och de kan tolka resultaten på cirka 10 minuter, vilket eliminerar behovet av insamling av parade serum för senare antikroppsmätning, även om felaktiga resultat ibland erhålls när endast enskilda serumprover analyseras.

Båda testerna har en måttlig komplexitetsklassificering enligt CLIA (Clinical Laboratory Improvement Amendment), vilket gör att många läkare kan erbjuda serologiska analyser för M pneumoniae-antikroppar som ett point-of-care-test så att det kan användas för att styra patientens behandling.

Dessa tester för enstaka prov har de begränsningar som beskrivs ovan; den kanske mest praktiska användningen av IgM ImmunoCard är när en akut infektion med M pneumoniae misstänks hos barn och unga vuxna.

Molekylär analys

Forskare har utvecklat molekylärt baserade system för att detektera M pneumoniae med hjälp av polymeraskedjereaktion (PCR) eller andra tekniker. En mängd olika genmål har beskrivits för PCR-analyser för att upptäcka M pneumoniae i kliniska prover. Traditionell PCR ersätts gradvis av kvantitativa PCR-analyser i realtid. Nya publikationer visar att CARDS-toxingenen är känsligare för detektion av M pneumoniae än tester som är inriktade på P1-protein- eller ATPasegenerna.

Vissa referenslaboratorier erbjuder PCR-analyser som de själva har utvecklat för detektion av aktuell mykoplasmainfektion. Två molekylärbaserade tester för detektion av M pneumoniae är nu FDA-godkända för användning i USA. Ett av dessa är illumigene Mycoplasma assay (Meridian Bioscience, Inc.). Detta LAMP-test (loop-mediated isothermal amplification) gör det möjligt att påvisa M pneumoniae i upp till 10 kliniska prover som kan testas samtidigt inom en timme efter det att extraherat DNA har ställts in i inkubatorn/läsaren. Multiplex Biofire Diagnostics FilmArray RP upptäcker nukleinsyror i nasofaryngeala svabbprover för 20 patogener i luftvägarna, inklusive M pneumoniae, genom att behandla ett prov i taget, med resultat inom cirka en timme .

Dragning av mykoplasma i de övre luftvägarna under varierande perioder efter en tidigare infektion kan förvirra tolkningen av ett enskilt positivt resultat från PCR-analysen. Dessutom kan en PCR-analys avslöja ett mycket litet antal organismer som kanske inte har etiologisk betydelse.

Ett specifikt tröskelvärde för mängden mykoplasma i luftvägarna som kan skilja kolonisering från infektion har inte fastställts, så en mycket känslig detektionsmetod som PCR som utförs på ett icke-kvantitativt sätt kan överskatta den kliniska betydelsen av M pneumoniae som patogen, eftersom den ofta kokirkulerar med andra bakteriella och virala luftvägspatogener. Av dessa skäl kan molekylärbaserade tester åtföljas av serologiska tester för maximal diagnostisk noggrannhet om man inte testar en normalt steril kroppsvätska där förekomsten av ett obegränsat antal mykoplasmaformer skulle betraktas som ett bevis på sjukdom. Nyare kvantitativa realtids-PCR-analyser lindrar detta problem i viss mån.

Med tanke på serologins betydande begränsningar, odlingens förlängda omloppstid och okänslighet och den ökande tillgången till snabb diagnos av mykoplasmainfektion hos symtomatiska patienter med hjälp av molekylära baserade analyser är molekylära baserade tester nu den föredragna metoden för att diagnostisera M pneumoniae-infektion när de är tillgängliga för primärvårdsdoktorer via sjukhus- eller referenslaboratorier.