Stabilita metabolizovatelné esterové vazby v radioimunokonjugátech
Esterové vazby byly použity jako metabolizovatelné vazby ke snížení hladiny radioaktivity v necílových tkáních po podání protilátek značených kovovými radionuklidy. Při tomto radiochemickém návrhu protilátek by sice mělo dojít k rychlému rozštěpení esterových vazeb v necílových tkáních, ale zároveň je vyžadována vysoká stabilita esterových vazeb v plazmě, aby byly zachovány cílové hladiny radioaktivity. Pro posouzení strukturních požadavků na stabilizaci esterové vazby bylo vyvinuto nové bifunkční chelatační činidlo odvozené od benzyl-EDTA s esterovou vazbou, (1-benzyl]ethylendiamin-N,N,N‘,N‘ -tetraoctová kyselina; MESS-Bz-EDTA). MESS-Bz-EDTA byl spojen s thiolovanou monoklonální protilátkou (OST7, IgG1) připravenou redukcí jejích disulfidových vazeb za účelem zavedení esterové vazby v blízkosti molekuly protilátky. Pro srovnání byla s OST7 spojena 1-ethylenediamin-N,N,N‘,N‘-tetraoctová kyselina (EMCS-Bz-EDTA) a meleimidoethyl 3-jodohipurát (MIH) podle stejné spojovací chemie. Při inkubaci v 50% myší plazmě nebo v pufrovaném roztoku s neutrálním pH se radioaktivita OST7-MESS-Bz-EDTA-111In rychle uvolnila a po 24hodinové inkubaci v obou roztocích se uvolnilo více než 95 % původní radioaktivity v důsledku rozštěpení esterové vazby. Naproti tomu z OST7-MIH-131I se během stejné doby inkubace uvolnilo v obou roztocích pouze asi 20 % radioaktivity. Zatímco v biodistribučních studiích na myších byla u OST7-MIH-131I pozorována o něco rychlejší clearance radioaktivity z krve s nižšími hladinami radioaktivity v játrech a ledvinách než u OST7-EMCS-Bz-EDTA-111In, OST7-MESS-Bz-EDTA-111In vykazoval clearance radioaktivity z krve mnohem rychlejší a téměř srovnatelnou s OST7-MIH-131I a sukcinamidobenzyl-EDTA-111In. Tato zjištění, stejně jako předchozí poznatky o radioaktivně značených protilátkách s esterovými vazbami, naznačují, že zatímco zavedení esterové vazby v blízkosti molekuly protilátky stabilizuje esterovou vazbu proti přístupu esterázy, chemické struktury vazeb a radioaktivních značek připojených k esterovým vazbám hrají významnou roli v chemické stabilitě esterové vazby. Tím lze vysvětlit rozdílnou stabilitu esterových vazeb v dosud uváděných radioimunokonjugátech.