Lipofectamine

Pro 14, 2021
admin

Lipofectamine nebo Lipofectamine 2000 je běžné transfekční činidlo vyráběné a prodávané společností Invitrogen, které se používá v molekulární a buněčné biologii. Používá se ke zvýšení účinnosti transfekce RNA (včetně mRNA a siRNA) nebo plazmidové DNA do buněčných kultur in vitro pomocí lipofekce. Lipofectamin obsahuje lipidové podjednotky, které mohou ve vodném prostředí vytvářet liposomy, které zachycují transfekční náklad, např. plasmidy DNA.

Lipofectamin se skládá ze směsi DOSPA (2,3-dioleoyloxy-N- -N,N-dimethyl-1-propaniminium trifluoroacetátu) a DOPE (1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-fosfoetanolaminu) v poměru 3:1, která se komplexuje se záporně nabitými molekulami nukleových kyselin a umožňuje jim překonat elektrostatické odpuzování buněčné membrány. Kationtové lipidové molekuly přípravku Lipofectamine jsou tvořeny neutrálním ko-lipidem (pomocným lipidem). Lipozomy obsahující DNA (na povrchu kladně nabité) se mohou spojit se záporně nabitou plazmatickou membránou živých buněk díky neutrálnímu ko-lipidu, který zprostředkovává spojení lipozomu s buněčnou membránou, což umožňuje molekulám nákladu nukleové kyseliny přejít do cytoplazmy za účelem replikace nebo exprese.

Aby buňka mohla exprimovat transgen, musí se nukleová kyselina dostat do jádra buňky a zahájit transkripci. Transfekovaný genetický materiál však nemusí do jádra vůbec dorazit, místo toho je někde v průběhu doručování přerušen. V dělících se buňkách se materiál může dostat do jádra tak, že je zachycen v obnovujícím se jaderném obalu po mitóze. Ale také u nedělících se buněk výzkum ukázal, že lipofektamin zvyšuje účinnost transfekce, což naznačuje, že dodatečně pomáhá transfekovanému genetickému materiálu proniknout do neporušeného jaderného obalu.

Tuto metodu transfekce vynalezl Dr. Yongliang Chu.

.

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.