C/EBPA-mutationer hos AML-patienter med normal karyotyp

BAALC-uttrycksnivåerna i 67 AML-patienter med normal karyotyp varierade från 0,004 till 67,2. Tjugotre av de 67 patienterna (34,3 %) uppfyllde kriterierna för ”lågt” BAALC-uttryck, medan 44 patienter (65,7 %) klassificerades som ”högt” BAALC-uttryck. Återigen fastställde vi om BAALC mRNA-nivåerna i blod och benmärg korrelerade för en viss patient. Fig. 3B visar faktiskt en stark korrelation (r = 0,9501) mellan BAALC-nivåerna i blod och benmärg hos de 29 patienter hos vilka både benmärg och blod fanns tillgängliga vid diagnosen. Vi utvärderade också om andelen blaster i ett visst prov korrelerade med BAALC-uttrycksnivåerna. Ingen korrelation hittades dock mellan andelen blaster och BAALC-uttryck (Pearsons korrelation, r = 0,0907).

Interessant nog skilde sig inte patienter med högt BAALC-uttryck signifikant från patienter med lågt BAALC-uttryck när det gällde leukocytantalet vid diagnosen och medianvärdet för LDH vid diagnosen (tabell 1). Vi observerade dock att monoblastiska subtyper av AML övervägande hade lågt BAALC-uttryck (80 %; 12 av 15 AML-M4 och M5) som tidigare rapporterats (24). Lågt BAALC-uttryck observerades i myeloblastisk AML (M1 och M2) hos endast 25,6 % (11 av 43 patienter). Däremot observerades högt BAALC-uttryck främst i myeloblastiska subtyper av AML (32 av 43; 74,4 %) och odifferentierad AML (M0; 5 av 5). Alla AML med M6- och M7-subtyper (fyra patienter) hade också högt BAALC-uttryck.

Interessant nog upptäcktes betydande skillnader i immunfenotypen beroende på olika BAALC-uttryck. Leukemiska celler med lågt BAALC-uttryck hade signifikant högre uttryck av antigenerna CD11b, CD15 och myeloperoxidas. Dessutom korrelerade lågt BAALC-uttryck med lågt CD34-uttryck (tabell 4).

Förhållandet till fullständig remission som uppnåddes efter induktionskemoterapi skiljde sig inte åt hos patienter med högt jämfört med lågt BAALC-uttryck (82 % jämfört med 91 %; P = 0,3008). DFS i median hos patienter med högt BAALC-uttryck var dock betydligt kortare (8,5 jämfört med 21 månader; P = 0,0152). Även den totala överlevnaden hos patienter med högt BAALC-uttryck var kortare jämfört med patienter med lågt BAALC-uttryck (10 jämfört med 21 månader; P = 0,0210). Sammanfattningsvis verkar högt BAALC-uttryck i AML med normal karyotyp vara förknippat med förkortad DFS och OS.

I fig. 4 visas dot blot-representationer av BAALC-uttrycksnivåer för alla patienter tillsammans (vänster kolumn; n = 67), för patienter med enbart FLT3-ITD (andra kolumnen; n = 19), för patienter med enbart CEBPA-mutationer (mellersta kolumnen; n = 12), för patienter som varken har FLT3-ITD- eller CEBPA-mutationer (fjärde kolumnen; n = 36), och slutligen för kontrollgruppen med 12 friska frivilliga. Vi fann att patienter med FLT3-ITD hade ett brett spektrum av BAALC-uttryck. Eftersom patienter med högt och lågt BAALC-uttryck med FLT3-ITD inte skiljde sig åt i sitt förlopp (data visas inte), drar vi slutsatsen att förekomsten av FLT3-ITD väger tyngre än betydelsen av BAALC-uttrycket. Intressant nog sågs patienter med CEBPA-mutationer övervägande i gruppen med ”högt” BAALC-uttryck. Endast tre av 12 patienter med CEBPA-mutationer fick återfall. Anmärkningsvärt är att dessa tre patienter uppvisade det högsta BAALC-uttrycket i gruppen av 12 AML-patienter med normal karyotyp och CEBPA-mutationer.

Vi analyserade också inom gruppen med högt BAALC-uttryck om DFS eller OS hos patienter med mycket högt uttryck (övre 50 %) var kortare än hos patienter med ”bara” högt uttryck (lägre 50 %). Patienter med mycket högt BAALC-uttryck skilde sig dock inte i DFS och OS från patienter med högt BAALC-uttryck (P = 0,497 respektive P = 0,757.). På samma sätt studerade vi inom gruppen med lågt BAALC-uttryck om det kliniska utfallet hos patienter med mycket lågt uttryck var mer gynnsamt än hos patienter med ”bara” lågt uttryck. Återigen observerade vi att patienter med mycket lågt BAALC-uttryck inte skiljde sig i DFS och OS från patienter med lågt BAALC-uttryck (P = 0,753 respektive P = 0,746). Dessa resultat stödjer användbarheten av vår cutoff som indikerar att denna cutoff verkligen verkar separera grupper av prognostiskt gynnsamma och ogynnsamma patienter.

Lågt BAALC-uttryck i normal karyotyp akut myeloisk leukemi med varken CEBPA- eller FLT3-ITD-mutationer är associerat med gynnsam prognos. Vi antog att bestämning av BAALC-uttryck kan vara särskilt användbart i undergruppen av AML-patienter med varken FLT3-ITD- eller CEBPA-mutationer (36 av 67). Medianvärdet för BAALC-uttrycket hos patienterna i denna undergrupp var cirka 10 gånger högre än värdet i vår kontrollgrupp. Arton av dessa 36 patienter (50 %) hade lågt BAALC-uttryck och 18 hade högt BAALC-uttryck.

Det mest intressanta är att det kliniska förloppet för dessa två undergrupper skiljde sig dramatiskt åt både när det gäller DFS (18,4 respektive 7,4 månader; P = 0,0001) och OS (22,8 respektive 9.1 månader respektive; P = 0,0001) som visas i fig. 5A och B. Vi drar således slutsatsen att BAALC-uttryck tillför betydande prognostisk information, särskilt hos de AML-patienter med normal karyotyp där det hittills saknas andra markörer som FLT3-ITD- eller CEBPA-mutationer.

Slutligt gjorde vi en multivariabel analys för att undersöka om CEBPA-mutationer, FLT3-ITD och BAALC-uttryck utgör oberoende prognostiska markörer vid AML med normal karyotyp. Resultaten av denna analys sammanfattas i tabell 6 som visar att CEBPA-mutationer, FLT3-ITD och BAALC-uttryck verkar vara starka oberoende prediktorer för utfallet vid AML med normal karyotyp.