Constatări

După rănirea nervilor periferici, se inițiază un model secvențial de degenerare axonală și degradare a mielinei, urmat de regenerare rapidă . Procesul inflamator și mediatorii săi au fost implicați în reglarea atât a procesului degenerativ axonal, cât și a celui de regenerare după leziune . Unul dintre mediatorii inflamatori care ar putea juca un rol important în timpul acestor procese este enzima ciclooxigenază-2 (COX-2), responsabilă de metabolizarea acidului arahidonic din membrana celulară în prostaglandine, printre alte efecte proinflamatorii .

COX-2 este suprareglementată și producția de prostaglandine este crescută în macrofage și în celulele Schwann, după diferite tipuri de leziuni ale nervilor periferici . Studiile privind reglarea în sus a COX-2 în timpul regenerării axonale s-au concentrat în principal asupra participării sale la inducerea durerii neuropatice, în loc să se concentreze asupra procesului de regenerare în sine . Cu toate acestea, faptul că COX-2 este atât de puternic suprareglementată după o leziune nervoasă și, de asemenea, capabilă să moduleze mediatorii inflamatori, cum ar fi citokinele proinflamatorii, sugerează un rol important pentru această enzimă și în evoluția regenerării nervoase .

Celecoxib (CLX) este un inhibitor selectiv al COX-2 cu proprietăți antiinflamatorii și analgezice puternice . CLX a demonstrat proprietăți neuroprotectoare în modele de ischemie cerebrală și nevrită inflamatorie experimentală . Utilizarea CLX s-a dovedit a fi, de asemenea, eficientă în reducerea durerii neuropatice în urma leziunilor nervilor periferici la șobolani . Un studiu recent a constatat că acidul acetil salicilic, un inhibitor neselectiv al COX, ar putea accelera recuperarea funcțională după o leziune prin strivire nervoasă la șobolan, deși se crede că sunt implicate și alte mecanisme de acțiune . Cu toate acestea, efectele CLX asupra recuperării funcționale după o leziune a nervilor periferici, din câte știm noi, nu au fost studiate până acum. În acest studiu am investigat efectele CLX asupra recuperării funcționale după o leziune a nervului periferic folosind un model de strivire a nervului sciatic la șobolan.

Procedurile cu animale au fost efectuate în conformitate cu utilizarea și îngrijirea adecvată a animalelor de laborator. În acest studiu au fost utilizați 15 șobolani Wistar masculi (250-300 g). Animalele au fost ținute într-o cameră cu temperatură controlată, cu un ciclu lumină/întuneric de 12 ore, cu acces la hrană și apă ad libitum.

Animalele au fost repartizate aleatoriu în 3 grupuri diferite: Experimental (n = 5), Control (n = 5) și grupul Sham (n = 5). În grupurile experimentale și de control, strivirea unilaterală a nervului sciatic a fost efectuată după cum urmează: După anestezie cu pentobarbital (Anestesal, Pfizer Inc, Mexic) (50 mg/kg ip), se face o mică incizie în strâmtoarea superioară, iar mușchii sunt separați pentru a expune nervul sciatic. Nervii sunt apoi zdrobiți cu o pensă hemostatică nerostită de 1 mm lățime, la o forță standardizată, la nivelul stângii medii, timp de 30 de secunde. În grupul simulat, nervul sciatic a fost expus, dar nu a fost zdrobit. După aceea, mușchiul și pielea sunt suturate separat, iar animalul este lăsat să se recupereze în cuști individuale. Această leziune prin strivire poate fi utilizată ca model de axonotmesis pentru a studia recuperarea funcției nervoase .

Animalele din grupul experimental au primit CLX (Celebrex®, Pfizer Inc, Mexic) (10 mg/kg ip) imediat înainte și zilnic timp de 7 zile după leziune. Grupul de control a primit soluție salină normală în aceleași perioade de timp.

Evaluarea indicelui funcțional sciatic (SFI), o evaluare fiabilă a recuperării nervilor , a fost efectuată la toate animalele în zilele 0 (înainte de operație) și în zilele 1, 7, 14 și 21 după operație. Picioarele posterioare ale șobolanilor au fost marcate cu cerneală neagră solubilă în apă, iar apoi animalul a fost lăsat să se plimbe liber pe o pasarelă limitată de 12 cm lățime și 50 cm lungime, lăsându-și amprentele picioarelor pe o bucată de hârtie albă care acoperea podeaua pasarelei. Distanța de la călcâi până la vârful celui de-al treilea deget de la picior, precum și distanța dintre degetele de la picior și cea intermediară, definite ca fiind distanța dintre primul și al cincilea, respectiv dintre al doilea și al patrulea deget de la picior, au fost măsurate cu o precizie de 0,5 mm. Au fost evaluate atât membrele normale, cât și cele lezate. Am măsurat 3 urme de picioare pentru fiecare membru și pentru fiecare animal și apoi am făcut media valorilor pentru a calcula SFI pentru fiecare animal, folosind o formulă descrisă în altă parte. Un SFI care se apropie de 100 indică o afectare severă, în timp ce un SFI care se apropie de 0 este considerat normal.

Recuperarea funcțională a fost, de asemenea, examinată prin înregistrarea zilei în care a început activitatea motorie și mersul la toate animalele, așa cum a fost descris de Gold et al . Doi observatori orbi examinează zilnic recuperarea și înregistrează numărul de zile de care are nevoie fiecare animal pentru a fi capabil să îndrepte piciorul și să își miște degetele de la picioare (debutul motricității) și pentru a merge folosind piciorul și degetele de la picioare ale membrului posterior lezat (debutul mersului). Valorile sunt apoi mediate pentru a calcula media pentru fiecare grup și sunt comparate.

Schimbările în SFI în timp au fost comparate între grupuri folosind o analiză de varianță (ANOVA) cu măsuri repetate în două direcții. Atunci când ANOVA a arătat o diferență semnificativă între grupuri, am aplicat un test Tukey post hoc pentru a găsi locația diferenței. ANOVA cu o singură cale a fost utilizată pentru a compara debutul motor și de mers între grupul de control și cel experimental. Datele au fost analizate cu software-ul statistic SPSS 11.0 (SPSS Inc. Software, Chicago, Illinois, SUA), iar toate valorile sunt exprimate ca medie +/- SD, iar P < 0,05 a fost considerat semnificativ din punct de vedere statistic.

Înainte de operație, toate animalele au avut valori SFI apropiate de 0 (normal), iar imediat după strivirea nervului valori de peste 90 (grav afectate), fără diferențe statistice între grupuri. Ulterior, începând din ziua 1 și până în ultima zi a studiului, șobolanii din grupul experimental au prezentat o recuperare semnificativ mai rapidă în comparație cu grupul de control (P = 0,02, între subiecți, măsuri repetate ANOVA), testele post hoc arătând o diferență semnificativă în ziua 7 (80.2 +/- 6,3 vs. 66 +/- 12,1; P = 0,04) Debutul motor și al zilei de mers a fost atins mai devreme la șobolanii din grupul experimental comparativ cu grupul de control, fiind semnificativ din punct de vedere statistic doar pentru debutul motor (11,4 +/- 1,1 vs. 13,6 +/- 1,8). Grupul Sham a avut valori normale ale SFI pe toată durata studiului (tabelul (tabelul11).

Rezultatele noastre arată că CLX poate accelera recuperarea funcțională după strivirea nervului sciatic la șobolan. Cu toate acestea, dimensiunea mică a eșantionului și SD mare sunt punctele slabe statistice ale studiului nostru, iar absența dovezilor histologice sau electrofiziologice ne împiedică să concluzionăm că CLX are efecte similare asupra regenerării axonale. S-a demonstrat că COX-2 modulează neuroinflamarea în diverse afecțiuni neurologice, iar citokinele proinflamatorii au fost implicate în orchestrarea procesului inflamator care duce la degenerare și regenerare după leziuni nervoase . Una dintre aceste citokine, factorul de necroză tumorală alfa (TNF-alfa), este cunoscută pentru faptul că induce activarea factorului nuclear kappab (NF-kappab), un factor de transcripție care promovează producția suplimentară de citokine proinflamatorii în celulele inflamatorii . Dovezile recente au arătat că CLX poate inhiba activarea dependentă de TNF-alfa a NF-kappaB, ceea ce duce la o puternică activitate antiinflamatorie . Macrofagele și celulele Schwann joacă, de asemenea, roluri esențiale în degenerarea și regenerarea axonală în nervii periferici lezați, iar COX-2 este crescută în aceste două celule în timpul inflamației nervilor periferici . În plus, s-a demonstrat că inhibarea COX-2 inhibă activitatea neurotoxică a macrofagelor și a celulelor gliale în neuronii in vitro . Dacă unul dintre aceste efecte este mecanismul responsabil pentru rezultatele studiului nostru necesită investigații suplimentare. Cu toate acestea, rezultatele noastre sugerează că CLX poate modifica în mod benefic cursul recuperării funcționale după leziuni ale nervilor periferici.

.