Considerați posibilitatea unei infecții cu M pneumoniae la pacienții de orice vârstă care prezintă infecții ale tractului respirator. Investigațiile de laborator trebuie să se concentreze atât pe boala clinică (de exemplu, traheobronșită vs. pneumonie), cât și pe numeroasele etiologii infecțioase posibile care pot cauza manifestări similare din punct de vedere clinic. De asemenea, amploarea investigațiilor de laborator ar trebui să reflecte gravitatea bolii și dacă boala justifică sau nu spitalizarea.

În până la jumătate din toate cazurile de pneumonii dobândite în comunitate, etiologia microbiologică nu este niciodată determinată, în ciuda testelor de laborator adecvate. Boala ușoară tipică cauzată de M pneumoniae la persoane de altfel sănătoase poate să nu justifice o investigație microbiologică cuprinzătoare, deoarece tratamentul empiric cu antimicrobiene orale poate acoperi M pneumoniae și majoritatea celorlalți agenți bacterieni care produc boli similare.

Analiză de laborator

Vreo 25 % dintre pacienți dezvoltă leucocitoză; restul au un număr de leucocite în intervalul de referință.

Pacienții pot avea o VSG crescută.

Răspunsul celular al sputei este mononuclear, fără bacterii vizibile la colorația Gram.

Aproximativ 75% dintre pacienți au un titru de aglutinină rece de cel puțin 1:32 până în a doua săptămână de boală, care dispare în 6-8 săptămâni. Acesta nu este un test specific pentru infecția cu M pneumoniae, dar cu cât titrul aglutininei la rece este mai mare (>1:64) la un pacient cu pneumonie dobândită în comunitate, cu atât este mai probabil ca aglutininele la rece să fie datorate lui M pneumoniae. Nu este probabil să apară anomalii specifice ale funcției hepatice sau renale.

Pentru a confirma infecția micoplasmică a tractului respirator, sunt necesare culturi, teste pe bază moleculară și/sau teste serologice.

Cultura

Specimenele din tractul respirator adecvate pentru cultură includ tampoane de gât, spută, aspirate traheale, lichid de lavaj bronșic, lichid pleural sau țesut de biopsie pulmonară, în funcție de starea clinică a pacientului.

Organismele micoplasmice au cerințe de creștere fastidioase și sunt adesea dificil și lent de cultivat in vitro. Aveți grijă, în timpul recoltării specimenului, să inoculați într-un mediu de transport adecvat (de exemplu, bulion SP4 sau mediu de transport universal), la patul bolnavului, ori de câte ori este posibil, și să nu permiteți desecarea. Clinicienii recomandă congelarea la -70°C dacă probele nu pot fi transportate la laboratorul de diagnostic imediat după recoltare.

Creșterea în cultură este lentă, necesitând 3 săptămâni sau mai mult în unele cazuri, iar cultura nu este extrem de sensibilă pentru detectarea infecției cu M pneumoniae. Mediul de cultură este adesea indisponibil, cu excepția laboratoarelor de referință specializate. În cazul în care se încearcă cultura, ar trebui să se efectueze, de asemenea, proceduri alternative, inclusiv serologie și/sau teste de amplificare a acidului nucleic pe bază moleculară.

Testări serologice

Medicii folosesc cel mai frecvent serologia pentru a confirma infecția cu M pneumoniae, chiar dacă aceste teste suferă de probleme semnificative.

Mulți clinicieni preferă testele imunoenzimatice în locul celor mai vechi și mai puțin sensibile teste de fixare a complementului și a titlurilor nespecifice de aglutinină rece. Aceste tipuri de teste sunt disponibile pe scară largă prin intermediul laboratoarelor comerciale de referință.

Pentru că infecția primară nu garantează imunitatea protectoare împotriva infecțiilor viitoare și pentru că imunoglobulina G (IgG) reziduală poate rămâne de la întâlnirile anterioare cu organismul, experții au lansat un mare impuls pentru a dezvolta teste sensibile și specifice care pot face diferența între infecția acută și cea la distanță.

Diagnosticul definitoriu necesită seroconversie documentată prin eșantioane perechi obținute la 2-4 săptămâni distanță. Deși unii cercetători pretind că testele de imunoglobulină M (IgM) sau imunoglobulină A (IgA) cu un singur titru relevă infecția actuală, IgM poate persista până la câteva luni la unele persoane, iar mulți adulți pot să nu prezinte un răspuns detectabil la IgM. Prin urmare, bazarea pe un singur test serologic poate fi înșelătoare din punct de vedere clinic, iar experții recomandă să se bazeze diagnosticul de infecție acută pe seroconversia măsurată simultan în testele pentru IgM și IgG. Utilizarea serologiei pentru diagnosticul infecției micoplasmice este valabilă numai dacă pacientul are o capacitate satisfăcătoare a sistemului imunitar umoral de a monta un răspuns de anticorpi.

Sesizări imunoenzimatice de diagnostic rapid

Unul dintre cele mai semnificative progrese din ultimii ani pentru diagnosticul infecțiilor tractului respirator cu M pneumoniae este dezvoltarea de teste imunoenzimatice calitative, rapide, pe bază de membrană, pe o singură probă, care sunt ușor adaptabile la laboratorul din cabinetul medicului primar.

Sistemul de testare a anticorpilor Remel IgG/IgM (Thermo-Fisher) măsoară simultan atât IgG, cât și IgM.

Meridian ImmunoCard (Meridian Bioscience, Inc.) măsoară numai IgM.

Medicii pot efectua ambele teste fără expertiză sau echipamente speciale și pot interpreta rezultatele în aproximativ 10 minute, eliminând necesitatea recoltării de seruri perechi pentru măsurarea ulterioară a anticorpilor, deși uneori se obțin rezultate eronate atunci când sunt analizate doar probe serice unice.

Ambele teste au o clasificare de complexitate moderată în conformitate cu Clinical Laboratory Improvement Amendment (CLIA), ceea ce permite multor medici să ofere teste serologice pentru anticorpii M pneumoniae ca un test point-of-care, astfel încât acesta să poată fi utilizat pentru a direcționa managementul pacientului.

Aceste teste pe o singură probă au limitări, așa cum s-a descris mai sus; probabil că cea mai practică utilizare a IgM ImmunoCard este atunci când se suspectează o infecție acută cu M pneumoniae la copii și adulți tineri.

Analiză moleculară

Cercetătorii au dezvoltat sisteme bazate pe molecule pentru detectarea M pneumoniae folosind reacția în lanț a polimerazei (PCR) sau alte tehnologii. A fost descrisă o varietate de ținte genetice pentru testele PCR pentru detectarea M pneumoniae în probele clinice. PCR tradițională este înlocuită treptat cu teste PCR cantitative în timp real. Publicații recente indică faptul că gena toxinei CARDS este mai sensibilă pentru detectarea M pneumoniae decât testele care vizează proteina P1 sau genele ATPazei.

Câteva laboratoare de referință oferă teste PCR pe care le-au dezvoltat ele însele pentru detectarea infecției micoplasmice curente. Două teste pe bază moleculară pentru detectarea M pneumoniae sunt acum aprobate de FDA pentru utilizare în Statele Unite. Unul dintre acestea este testul illumigene Mycoplasma (Meridian Bioscience, Inc.). Acest test de amplificare izotermă mediată de buclă (LAMP) permite detectarea lui M pneumoniae în până la 10 probe clinice care pot fi testate simultan în decurs de o oră după ce ADN-ul extras este instalat în incubator/lector. Biofire Diagnostics FilmArray RP multiplex Biofire Diagnostics detectează acizii nucleici în tampoane nazofaringiene pentru 20 de agenți patogeni ai tractului respirator, inclusiv M pneumoniae, procesând câte o probă pe rând, cu rezultate în aproximativ o oră .

Transportarea micoplasmelor în tractul respirator superior pentru perioade variabile după o infecție anterioară poate confunda interpretarea unui singur rezultat pozitiv al testului PCR. Mai mult, un test PCR poate evidenția un număr foarte mic de organisme care pot să nu aibă semnificație etiologică.

Nu a fost stabilit un prag specific al cantității de micoplasme din tractul respirator care să poată diferenția colonizarea de infecție, astfel încât o metodă de detecție foarte sensibilă, cum ar fi PCR, efectuată într-o manieră necuantitativă, poate supraestima importanța clinică a lui M pneumoniae ca agent patogen, deoarece acesta cocirculează adesea cu alți agenți patogeni respiratori bacterieni și virali. Din aceste motive, testele pe bază moleculară pot fi însoțite de teste serologice pentru o acuratețe maximă a diagnosticului, cu excepția cazului în care se testează un lichid corporal în mod normal steril, în care prezența oricărui număr de micoplasme ar fi considerată o dovadă de boală. Cele mai noi teste cantitative PCR în timp real ameliorează această problemă într-o oarecare măsură.

Datorită limitărilor semnificative ale serologiei, timpului de răspuns prelungit și insensibilității culturii, precum și disponibilității din ce în ce mai mari a diagnosticului rapid al infecției micoplasmice la pacienții simptomatici prin teste pe bază moleculară, testele pe bază moleculară sunt acum metoda preferată pentru diagnosticarea infecției cu M pneumoniae atunci când sunt disponibile pentru medicii de îngrijire primară prin intermediul unui spital sau al unui laborator de referință.

.