Protocolo de Coloração de Safranin O para Cartilagem

Kits Especiais de Coloração de NovaUltra

Descrição: Este método é usado para a detecção de cartilagem, mucina e grânulos de mastócitos em secções de tecido fixadas em formol e incluídas em parafina, e também pode ser usado para secções congeladas. A cartilagem e a mucina serão coradas de laranja a vermelho, e os núcleos serão corados de preto. O fundo é corado de verde azulado.

Fixação: Formalina fixa, seções embutidas em parafina.

Soluções e Reagentes:

Solução de Hematoxilina de Ferro de Weigert:

Solução de reserva A:

Hematoxilina —————————– 1 g

95% Álcool —————————– 100 ml

Solução de reserva B:

29% Cloreto férrico em água ———– 4 ml

Água destilada ————————– 95 ml

Ácido clorídrico, concentrado —- 1ml

Hematoxilina Weigert’s Iron Hematoxylin Working Solution:

Misturar partes iguais da solução de reserva A e B. Esta solução de trabalho é estável durante cerca de 4 semanas.

0.05% Solução Fast Green (FCF):

Verde rápido, FCF, C.I. 42053 ————- 0,5 g

Água destilada —————————- 1000 ml

1% Solução de Ácido Acético:

Ácido acético, glacial ————————- 1 ml

Água destilada —————————— 99 ml

0,1% Solução de Safranina O:

Safranina O, C.I. 50240 ——————– 0,1 g

Água destilada —————————– 100 ml

Procedimento:

1. Despejar e hidratar as lâminas para água destilada.

2. Mancha com solução de ferro Weigert para trabalhar a hematoxilina durante 10 minutos.

3. Lavar em água corrente da torneira durante 10 minutos.

4. Mancha com solução de trabalho FCF (fast green) durante 5 minutos.

5. Enxaguar rapidamente com solução de ácido acético a 1% por não mais do que 10 -15 segundos.

6. Mancha em solução de safranina O a 0,1% durante 5 minutos.

7. Desidratar e limpar com 95% de álcool etílico, álcool etílico absoluto e xileno, usando 2 trocas cada, 2 minutos cada.

8. Montar usando meio resinoso.

Resultados:

Nuclei ———————————————- preto

Cytoplasm —————————————– verde azulado

Cartilagem, mucina, grânulos de mastócitos ———– laranja para vermelho

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3. Camplejohn KL, Allard SA. Limitações da coloração de safranina ‘O’ em cartilagem desprovida de proteoglicanos demonstradas com anticorpos monoclonais.Histoquímica. 1988;89(2):185-8. PubMed Abstract