Considerar a possibilidade de infecção por M pneumoniae em pacientes de qualquer idade que apresentem infecções do trato respiratório. A investigação laboratorial deve focar tanto a doença clínica (por exemplo, traqueobronquite vs. pneumonia) como as muitas etiologias infecciosas possíveis que podem causar manifestações clinicamente semelhantes. A extensão da investigação laboratorial também deve reflectir a gravidade da doença e se a doença justifica a hospitalização.

Em até metade dos casos de pneumonias adquiridas na comunidade, a etiologia microbiológica nunca é determinada, apesar dos testes laboratoriais apropriados. A típica doença leve causada por M pneumoniae em pessoas saudáveis pode não justificar uma investigação microbiológica abrangente porque o tratamento empírico com antimicrobianos orais pode cobrir M pneumoniae e a maioria dos outros agentes bacterianos que produzem doenças semelhantes.

Análise laboratorial

Vinte e cinco por cento dos pacientes desenvolvem leucocitose; os restantes têm contagens de leucócitos dentro da faixa de referência.

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Patientes podem ter um ESR elevado.

A resposta celular do escarro é mononuclear, sem bactérias visíveis com coloração de Gram.

Sobre 75% dos pacientes têm um título de aglutinina fria de pelo menos 1:32 até a segunda semana da doença, desaparecendo por 6-8 semanas. Este não é um teste específico para a infecção por M pneumoniae mas quanto maior for o título de aglutinina fria (>1:64) num paciente com pneumonia adquirida na comunidade, maior a probabilidade de as aglutininas frias serem devidas ao M pneumoniae. Não é provável que ocorram anomalias específicas da função hepática ou renal.

Para confirmar infecção do trato respiratório micoplasmático, são necessários cultura, testes moleculares e/ou testes serológicos.

Cultura

Exemplosivos do tracto respiratório adequados para cultura incluem esfregaços de garganta, expectoração, aspirados traqueais, líquido de lavagem brônquica, líquido pleural, ou tecido de biópsia pulmonar, dependendo da condição clínica do paciente.

Os organismos micoplasmáticos têm requisitos de crescimento fastidioso e são frequentemente difíceis e lentos de crescer in vitro. Tome cuidado durante a coleta da amostra para inocular em um meio de transporte adequado (por exemplo, caldo SP4 ou meio de transporte universal), à beira do leito sempre que possível, e para não permitir a dessecação. Os médicos aconselham o congelamento a -70ºC se as amostras não puderem ser transportadas para o laboratório de diagnóstico imediatamente após a colheita.

O crescimento em cultura é lento, requerendo 3 semanas ou mais em alguns casos, e a cultura não é extremamente sensível para detectar a infecção por M pneumoniae. O meio de cultura muitas vezes não está disponível, excepto em laboratórios especializados de referência. Se a cultura for tentada, também devem ser realizados procedimentos alternativos, incluindo testes serológicos e/ou de amplificação de ácido nucléico de base molecular.

Testes serológicos

Os médicos usam a sorologia com mais frequência para confirmar a infecção por M pneumoniae, embora estes testes sofram de problemas significativos.

Muitos clínicos preferem ensaios de imunoabsorção enzimática a ensaios de fixação de complemento mais antigos e menos sensíveis e títulos não específicos de aglutinina fria. Estes tipos de testes estão amplamente disponíveis através de laboratórios comerciais de referência.

Porque a infecção primária não garante imunidade protectora contra infecções futuras e a imunoglobulina residual G (IgG) pode permanecer de encontros anteriores com o organismo, os especialistas lançaram um grande impulso para desenvolver testes sensíveis e específicos que podem diferenciar entre infecção aguda e remota.

O diagnóstico definitivo requer seroconversão documentada por amostras pareadas obtidas com 2-4 semanas de intervalo. Embora alguns pesquisadores afirmem que os ensaios de imunoglobulina M (IgM) ou imunoglobulina A (IgA) de dose única revelam infecção atual, a IgM pode persistir por até vários meses em algumas pessoas, e muitos adultos podem não apresentar uma resposta de IgM detectável. Portanto, confiar em um único teste sorológico pode ser clinicamente enganoso, e especialistas recomendam basear o diagnóstico de infecção aguda na seroconversão medida simultaneamente em ensaios tanto para IgM quanto para IgG. A utilização da serologia para o diagnóstico de infecção micoplasmática só é válida se o doente tiver uma capacidade satisfatória do sistema imunitário humoral para montar uma resposta de anticorpos.

ensaios imunossorventes ligados a enzimas de diagnóstico rápido

Um dos avanços mais significativos nos últimos anos para o diagnóstico de infecções do tracto respiratório por M pneumoniae é o desenvolvimento de ensaios imunossorventes qualitativos, rápidos, de um único espécime, ligados a enzimas de membrana que são facilmente adaptáveis ao laboratório do consultório do médico de clínica geral.

O Remel IgG/IgM Antibody Test System (Thermo-Fisher) mede IgG e IgM simultaneamente.

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O Meridian ImmunoCard (Meridian Bioscience, Inc.) mede apenas IgM.

Os médicos podem realizar ambos os testes sem conhecimentos ou equipamento especial, e podem interpretar os resultados em aproximadamente 10 minutos, eliminando a necessidade de recolher soros emparelhados para posterior medição de anticorpos, embora por vezes se obtenham resultados errados quando se analisam apenas amostras de soro únicas.

Testes têm uma classificação de complexidade moderada sob a Emenda de Melhoria do Laboratório Clínico (CLIA), permitindo que muitos médicos ofereçam ensaios serológicos para os anticorpos M pneumoniae como um teste de ponto de tratamento, para que possa ser usado para orientar o manejo do paciente.

Os ensaios de um único espécime têm limitações como descrito acima; talvez a utilização mais prática para o IgM ImmunoCard seja quando se suspeita de uma infecção aguda com M pneumoniae em crianças e adultos jovens.

Análise molecular

Os investigadores desenvolveram sistemas de base molecular para a detecção de M pneumoniae utilizando a reacção em cadeia da polimerase (PCR) ou outras tecnologias. Uma variedade de alvos genéticos tem sido descrita para ensaios de PCR para detecção de M pneumoniae em amostras clínicas. A PCR tradicional está sendo gradualmente substituída por ensaios quantitativos de PCR em tempo real. Publicações recentes indicam que o gene da toxina CARDS é mais sensível para a detecção de M pneumoniae do que os ensaios que visam os genes da proteína P1 ou ATPase.

alguns laboratórios de referência oferecem ensaios de PCR que eles próprios desenvolveram para a detecção de infecção micoplasmática actual. Dois testes de base molecular para detecção de M pneumoniae são agora aprovados pela FDA para uso nos Estados Unidos. Um deles é o ensaio de micoplasma iluminigeno (Meridian Bioscience, Inc.). Este ensaio de amplificação isotérmica mediada por laço (LAMP) permite a detecção de M pneumoniae em até 10 amostras clínicas que podem ser testadas simultaneamente dentro de uma hora após a extracção do ADN na incubadora/leitor. A multiplex Biofire Diagnostics FilmArray RP detecta ácidos nucleicos em esfregaços nasofaríngeos para 20 patogénios do tracto respiratório, incluindo M pneumoniae, processando uma amostra de cada vez, com resultados em cerca de uma hora .

Carriage of mycoplasmas in the upper respiratory tract for variable periods following prior infection may confound the interpretation of a single positive PCR test test. Além disso, um ensaio de PCR pode revelar números muito pequenos de organismos que podem não ter significado etiológico.

Um limiar específico de quantidade de micoplasmas no trato respiratório que pode diferenciar a colonização da infecção não foi estabelecido, portanto um método de detecção altamente sensível como a PCR realizada de forma não quantitativa pode sobrestimar a importância clínica do M pneumoniae como patógeno, uma vez que frequentemente cocircula com outros patógenos respiratórios bacterianos e virais. Por estas razões, os ensaios de base molecular podem ser acompanhados por ensaios serológicos para a máxima precisão diagnóstica, a menos que se teste um fluido corporal normalmente estéril no qual a presença de qualquer número de micoplasmas seria considerada evidência de doença. Novos ensaios quantitativos de PCR em tempo real aliviam este problema até certo grau.

Dadas as limitações significativas da serologia, o tempo de resposta prolongado e a insensibilidade da cultura, e a crescente disponibilidade de diagnóstico rápido da infecção micoplasmática em pacientes sintomáticos por ensaios de base molecular, os testes de base molecular são agora o método preferido para o diagnóstico da infecção por M pneumoniae quando disponíveis aos médicos de cuidados primários através de um hospital ou laboratório de referência.