Abstract

Tragicamente, as infecções do tracto genital ainda são um grande problema de saúde pública em muitas regiões. Este estudo foi realizado para determinar a prevalência de infecção cervical com Herpes simplex virus (HSV), Chlamydia trachomatis (CT), e Neisseria gonorrhoeae (NG) entre mulheres casadas referindo-se ao Hospital Iraniano, Dubai, EAU. Em uma pesquisa transversal retrospectiva, 201 pacientes do sexo feminino, com idade entre 16 e 80 anos, que se referiram ao Departamento de Obstetrícia e Ginecologia do Hospital Iraniano, Dubai, EAU, em 2010, foram inscritas. Os pacientes foram categorizados em três grupos etários: 15-30 (grupo I), 31-40 (grupo II) e 41 anos de idade (grupo III). Uma amostra de esfregaço cervical foi coletada de cada mulher e a prevalência de infecção cervical com HSV, TC e GN foi determinada pelo método PCR. HSV, TC e GN foram detectados em 6,5%, 10,4% e 5,5% das amostras de zaragatoa, respectivamente. Em relação à idade, foi observada uma diferença significativa para a prevalência de GN e HSV entre os grupos I e III. Devido à importância das doenças sexualmente transmissíveis (DST) na saúde pública, seu impacto duradouro na qualidade de vida e sua carga econômica, medidas de prevenção e educação da mulher parecem necessárias.

1. Introdução

Tragicamente, as infecções do tracto genital ainda são um grande problema de saúde pública em muitas regiões . Anualmente, nos Estados Unidos, foram registrados mais de 15 milhões de novos casos de doenças sexualmente transmissíveis (DSTs). Entre as mulheres, algumas delas podem levar a doenças inflamatórias pélvicas de longa duração, infertilidade, gravidez ectópica, dispareunia e câncer cervical . Anualmente, mais da metade dos novos casos de DST ocorre em indivíduos jovens entre 15 e 24 anos . Além disso, em mulheres jovens e adolescentes, elas podem resultar em depressão, baixo apoio social e estresse proeminente .

A maioria das DSTs como o vírus Herpes simplex (HSV), Chlamydia trachomatis (CT) e Neisseria gonorrhoeae (NG) mostraram ser assintomáticas em mulheres . O Herpes Genital é geralmente considerado como uma DST crônica comum tanto em países desenvolvidos como em desenvolvimento com morbidade substancial . A infecção é causada por dois tipos de vírus, incluindo HSV-2 (principalmente) e HSV-1 (às vezes), enquanto que sua prevalência e incidência aumentaram nas últimas três décadas .

a infecção por TCT é a causa mais frequente de DST bacterianas no mundo, especialmente em mulheres jovens . A infecção é assintomática na maioria dos casos e pode ser transmitida durante o contato sexual vaginal, oral ou anal e pode ser transmitida pela mãe também ao recém-nascido .

Gonorréia é causada por GN e foi demonstrado que este patógeno tem o potencial de desenvolver resistência a agentes antimicrobianos freqüentemente usados, especialmente em pacientes não curadas. Estes casos podem continuar a transmitir e facilitar o rápido surgimento de resistência antimicrobiana. A taxa de incidência da doença é alta; portanto, o diagnóstico de infecções sintomáticas e assintomáticas é de grande importância .

Nos últimos anos, kits e palitos de detecção rápida têm sido usados como métodos comuns, convenientes e rápidos de rastreamento das DSTs. No entanto, novos métodos moleculares como a PCR, a PCR qualitativa e quantitativa em tempo real e a hibridação do ADN foram introduzidos como técnicas mais fiáveis no diagnóstico de uma grande variedade de DST, em comparação com os métodos serológicos. Além disso, o monitoramento do nível de DNA de um patógeno nos fluidos corporais pode revelar o estado da doença, sua resposta à medicação e seus padrões de resistência .

Em Dubai, EAU, o estilo de vida dos indivíduos mudou. Além disso, muitos trabalhadores migrantes ou investidores foram atraídos de mais de 100 países da Ásia, África, Europa, e assim por diante para esta cidade. Como Dubai é a 8ª cidade mais visitada por turistas no mundo e mostrou atrair mais de 15 milhões de turistas de vários países até 2015, portanto, as DSTs podem ser uma preocupação emergente de saúde pública em Dubai, Emirados Árabes Unidos. O rastreio das DSTs na população de Dubai pode ser o primeiro e muito crítico passo para a gestão de um problema de saúde pública. O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência de infecção cervical com HSV, TC e GN entre mulheres casadas referentes ao Hospital Iraniano, Dubai, EAU.

2. Temas e Métodos

2.1. População do Estudo

O estudo envolveu 201 pacientes do sexo feminino com idade entre 16-80 anos ( anos) que se referiram ao Departamento de Obstetrícia e Ginecologia do Hospital Iraniano, Dubai, em 2010, com sintomas como prurido na área genital, dispareunia, disúria ou descargas vaginais anormais. Os pacientes eram de nacionalidades diferentes (Tabela 1) e todos eles eram casados. As pacientes foram categorizadas em três grupos etários: 15-30 (grupo I), 31-40 (grupo II) e ≥41 anos de idade (grupo III). Uma amostra de esfregaço cervical foi coletada por meio de esfregaços estéreis de todos os pacientes e transferida em meio de transporte viral para o Centro de Pesquisa em Microbiologia Clínica Professor Alborzi, Hospital Nemazee, Shiraz, Irã, para posterior investigação. O estudo foi aprovado no Escritório de Educação e Pesquisa do Hospital Iraniano, Dubai.

2.2. Extracção de ADN

DNA foi extraído de amostras de esfregaço em 200 μL de meio de transporte viral pelo Invisorb spin virus DNA Mini Kit (Invitek, Berlim, Alemanha) de acordo com o protocolo do fabricante. Para a detecção da CT, foi adicionada ao kit de lise buffer kit uma quantidade padronizada de ADN de controlo interno, fornecido com o kit PCR em tempo real, para monitorizar a eficiência das extracções. Controlos negativos e positivos foram incluídos no processo de extracção.

2,3. PCR quantitativa em tempo real para detecção de HSV e CT

A PCR quantitativa em tempo real foi realizada usando pares de primer oligonucleotídeos e sondas específicas para a região de HSV1 e HSV2 glicoproteína B (gB), como relatado anteriormente . Os primers utilizados foram HSVFP (5′TCC CGG TAC GAA GAC CAG3′) e HSVRP (5′AGC AGG CCG CTG TCC TTG3′), e a sonda foi HSVTCP (5′FAMTGG TCC TCC AGC ATG GTG ATG TTG/C AGG TCGTAMRA3′). A reação foi realizada com o seguinte protocolo: 2 min de incubação a 50°C para ativação da AmpErase, 10 min a 95°C para ativação da polimerase e durante 45 ciclos, 15 segundos a 94°C para desnaturação, e 60 segundos a 58°C para recozimento, extensão e coleta de dados. Cada 50 μL de mistura de PCR continha 10 μL de DNA purificado, 840 nM de concentração de cada primer, e 100 nM de sonda em 1x TaqMan universal PCR master mix (Applied Biosystems, Branchburg, New Jersey, EUA).

Para a detecção de CT, foi realizada uma PCR quantitativa em tempo real com pares de primer oligonucleotídeos e sonda específica para genoma de CT pelo Advanced Kit (PrimerDesign Ltd., Millbrook Technology Campus, South Hampton, Reino Unido). A amplificação foi realizada utilizando reagentes universais TaqMan master mix PCR em tempo real (Roche, Branchburg, New Jersey, EUA). Foi feito com o seguinte protocolo de quatro passos: 2 min de incubação a 50°C para activação da AmpErase, 10 min a 95°C para activação da polimerase e 45 ciclos, 10 segundos a 95°C para desnaturação, e 60 segundos a 60°C para recozimento, extensão e recolha de dados.

Todas as amplificações foram efectuadas numa máquina Applied Biosystem Sequence Detector 7500 (Applied Biosystems, USA). Controles negativos foram incluídos no processo de extração entre cada 20 amostras clínicas. Todas as amostras negativas foram testadas duas vezes.

2.4. A detecção de NG

NG foi detectada com um kit de detecção PCR (CinnaGen Inc., Irão) de acordo com o protocolo do fabricante. A mistura de reacção foi aquecida a 94°C durante 3 min e depois incubada durante 35 ciclos de 94°C durante 45 segundos, 50°C durante 20 segundos e 72°C durante 30 segundos e durante 5 min a 72°C para uma extensão adicional. Os produtos PCR foram analisados em gel de agarose a 1%.

2,5. Análise estatística

Diferenças na prevalência de HSV, TC e GN entre as faixas etárias foram analisadas com teste de qui-quadrado. Além disso, a associação entre VHS, TC e GN e a ocorrência de infecção cervical fúngico-bacteriana foi analisada com o teste do qui-quadrado. Todos os dados foram analisados pelo software SPSS (SPSS for Windows, versão 16, SPSS Inc., Chicago, IL, EUA). Todos os valores de foram considerados estatisticamente significativos.

3. Resultados

Candida spp. e Coccobacilli infecção cervical foram considerados como infecção fúngico-bacteriana com prevalência de 45,3% e infecção não fúngico-bacteriana com prevalência de 54,7%. HSV e CT foram positivos em 13 (6,5%) e 21 (10,4%) amostras de zaragatoa, respectivamente. O número de cópias de DNA do VHS medido pelo ensaio de PCR em tempo real variou de 3,11 × 103 a 7,18 × 105 cópias/mL no meio de transporte viral (mediana de 4 × 104 cópias/mL) e o número de cópias de DNA da TC variou de 3,48 × 103 a 7,11 × 106 cópias/mL no meio de transporte viral (mediana de 3,33 × 105 cópias/mL). O GN foi detectado em 11 (5,5%) pacientes.

Quadro 2 apresenta a prevalência das doenças em diferentes faixas etárias. Nenhum dos pacientes apresentava infecções mistas. Não houve diferenças significativas na prevalência da TC entre as diferentes faixas etárias (). A prevalência de GN e HSV não foi significativamente diferente entre os grupos I e II e II e III (); entretanto, houve diferenças significativas entre os grupos I e III (). Além disso, as diferenças na prevalência de infecções por VHS, TC e GN não foram estatisticamente significativas entre os grupos de infecção cervical por fungos-bactérias e os grupos de infecções não-fúngicas-bactérias (). A Tabela 3 compara nossos dados em Dubai, EAU, para prevalência de HSV, TC e GN, com diferentes estudos.

4. Discussão

No estudo atual, das 201 mulheres, 6,5%, 10,4% e 5,5% estavam infectadas com HSV, TC e GN, respectivamente. Nossos achados atuais sobre infecção por HSV, CT e GN são consistentes com pesquisas anteriores sobre a prevalência de DST. Mais recentemente, pesquisa similar encontrou DNA do HSV-2 em 7% das 509 mulheres nos EUA. Um estudo anterior na Turquia mostrou que 12,7% das mulheres de baixo risco estavam infectadas com CT . Gaydos et al. relataram que 3,8% das suas populações estudadas femininas estavam infectadas com GN .

As literaturas anteriores indicavam que a maioria das infecções por HSV, CT e GN podem ser assintomáticas e de longa duração . Da mesma forma, no presente estudo, nenhuma das mulheres estava ciente de sua infecção antes de ser submetida ao rastreamento; entretanto, alguns sintomas clínicos eram visíveis. A prevalência de DST foi consistentemente maior em populações de alto risco em comparação com aquelas consideradas de menor risco. Os fatores de risco comumente citados associados às DSTs incluem estado não casado e múltiplos parceiros sexuais. Em Amsterdã, Holanda, a maior prevalência de HSV-1 ou HSV-2 foi observada nos grupos etários mais jovens, enquanto adolescentes e adultos nos anos vinte tiveram uma prevalência de 5,26% e 4,31%, respectivamente . No Peru, a prevalência de infecção em mulheres com infecção por TC foi de 6-5%, e com infecção por GN foi de 0-1% . Na Coreia do Sul, a taxa global de detecção da TC foi de 2,4% e do HSV tipo II foi de 0,8% . Na Tunísia, as mulheres trabalhadoras do sexo, CT, GN e HSV-2 PCR foram positivas em 72,9%, 11,2% e 1,1% das mulheres, respectivamente .

Embora estudos anteriores tenham mostrado que a idade jovem está associada a resultados positivos para CT, há alguns estudos que não relataram correlação entre idade e prevalência da doença . Da mesma forma, nossos resultados mostraram que não houve diferença significativa na prevalência da TC entre as diferentes faixas etárias.

Vários estudos mostraram que a prevalência de HSV aumentou consistentemente com a idade na maioria das áreas geográficas . Como esperado, os resultados deste estudo indicaram que a prevalência de HSV foi significativamente maior no grupo III quando comparado ao grupo I. Um estudo semelhante em Bangladesh revelou que a prevalência de anticorpos HSV-2 foi baixa entre mulheres casadas com menos de 20 anos de idade . Consequentemente, essa prevalência aumentou com a idade, o que pode estar relacionado à duração dos anos sexualmente ativos em mulheres.

Em contraste, nossos achados demonstraram que a prevalência de GN diminuiu com a idade e houve uma diferença significativa na prevalência da infecção entre os grupos I e III e a infecção foi mais prevalente em mulheres jovens. Este resultado é inconsistente com outro estudo. Na Nigéria, a infecção pelo GN foi mais comum em mulheres com 25 anos de idade

Um estudo na China entre mulheres trabalhadoras do sexo demonstrou que 8% das populações estudadas estavam infectadas pelo GN, o que estava próximo da taxa de infecção em mulheres jovens. Embora todas as mulheres do presente estudo fossem casadas e não tivessem relações sexuais fora da família, a prevalência de DST nessas pacientes era alta. Entretanto, a relação sexual do parceiro precisa ser avaliada. Inquérito anterior em França indicou que entre 111 parceiros masculinos assintomáticos de casais inférteis, a TC foi detectada pelos testes PCR COBAS AMPLICOR e serológicos em 6,3% e 4,5% dos pacientes, respectivamente . Portanto, parece que a monitorização dos parceiros sexuais é essencial para a prevenção das DST.

Infecção cervical fúngica bacteriana foi encontrada em 45,3% da população estudada, mas não houve diferenças significativas na prevalência de infecções por HSV, TC e GN entre o grupo de infecção cervical fúngico-bacteriana e o grupo de infecção não fúngico-bacteriana. Foi demonstrado que infecções mistas com vaginose bacteriana ou fúngica e DST podem acontecer, como HSV, TC, GN e T. vaginalis . São necessárias investigações adicionais para avaliar de forma abrangente o papel da infecção cervical bacteriana e fúngica na patogénese do HSV, CT, GN e outras DSTs. A monitorização da prevalência e incidência das DST entre a população e especialmente entre os jovens ajudaria as autoridades governamentais a realizar e avaliar as estratégias e os esforços de prevenção. Devido ao impacto considerável e duradouro das doenças sexualmente transmissíveis na qualidade de vida e à perda econômica das doenças sexualmente transmissíveis devido aos altos custos médicos, há necessidade de uma avaliação precisa das doenças sexualmente transmissíveis em todo o mundo. Jerman et al. relataram que 1,1 milhões de novos casos de DST ocorreram entre jovens pacientes na Califórnia em 2005, com um custo médico direto de 1,1 bilhões de dólares. Além disso, as DSTs sintomáticas são apenas a ponta do iceberg e a maioria dessas doenças é assintomática. Portanto, os programas de rastreamento de DSTs são importantes em todos os países para prevenir a transmissão da doença e ajudar os cientistas a planejar novos protocolos de tratamento. Devido à importância das DST na saúde pública, medidas de prevenção e educação das mulheres parecem necessárias.

Conflito de interesses

Os autores declaram não haver conflito de interesses em relação à publicação deste trabalho.

Conhecimento

Os autores apreciam a cooperação do Hospital Iraniano, especialmente dos Departamentos de Patologia e Obstetrícia e Ginecologia.