Abstract

Danshen foi capaz de reduzir o risco dos pacientes com doença coronária (CHD), mas o mecanismo ainda é largamente desconhecido. Os índices bioquímicos (perfil lipídico, marcadores de função renal e hepática e homocisteína (Hcy)) estão intimamente associados ao risco de doença coronária coronária. O nosso objectivo era investigar se o medicamento reduz o risco de CHD através da melhoria destes índices bioquímicos. Os pacientes receberam 10 comprimidos Danshen (27 mg/pílula) no grupo Dashen, enquanto os pacientes de controle receberam comprimidos placebo, três vezes ao dia. A duração do acompanhamento foi de três meses. Os índices bioquímicos séricos foram medidos, incluindo perfis lipídicos (colesterol LDL (LDL-C), colesterol HDL, colesterol total (TC), triglicerídeos (TG), apolipoproteína (Apo) A, ApoB, ApoE e lipoproteína (a) (Lp(a)); marcadores da função hepática (gama-glutamil transpeptidase (GGT), bilirrubina total (TBil), bilirrubina indireta (IBil) e bilirrubina direta (DBil)); marcador da função renal (ácido úrico (UA)) e Hcy. Após três meses de seguimento, o tratamento Danshen reduziu os níveis de TG, TC, LDL-C, Lp(a), GGT, DBil, UA, e Hcy (). Em contraste, o tratamento aumentou os níveis de HDL-C, ApoA, ApoB, ApoE, TBil, e IBil (). Conclusão. A Danshen pode reduzir o risco de DCH melhorando os índices bioquímicos dos pacientes com DCH.

1. Introdução

A cardiopatia coronária (DC) é a principal causa de morte no mundo. O número de pacientes com doenças cardiovasculares chegará a 82 milhões em 2020 . As CHD ainda não podem ser curadas e o tratamento atual evita o desenvolvimento de sintomas e reduz a incidência de infarto do miocárdio. A terapia de CHD inclui principalmente a reabilitação cardíaca baseada em exercícios, as mudanças dos padrões alimentares (interrupção do consumo de álcool) e medicação, bem como a substituição da válvula aórtica e cirurgia de revascularização do miocárdio. Portanto, devido à falta de uma terapia eficaz, é necessário descobrir novos tratamentos para a prevenção do risco de CHD.

A medicina tradicional chinesa (MTC) tem uma história profunda e tem sido praticada em muitas doenças. É uma abordagem para explorar novos medicamentos e mecanismos para a terapia de CHD. Danshen (Salvia miltiorrhiza), uma forma de MTC, é frequentemente aplicada na terapia de doenças coronárias. Os resultados de várias publicações apontam para propriedades antioxidantes, anti-inflamatórias, protetoras ou antiplaquetárias da Danshen e seus compostos ativos. Um ácido salvianolico B (SaB), um importante ingrediente bioativo na raiz da Danshen, está sendo sugerido para ser responsável por sua propriedade antioxidante. Outros compostos ativos solúveis em água, como o aldeído protocatecúrico (PAl), o ácido láctico 3,4-dihidroxifenil (DLA) e o SaB com peróxidos, foram capazes de prevenir a expressão de moléculas de adesão no endotélio vascular e inibir os danos vasculares e os componentes como Tanshinone IIA e Tanshinone IIB podem inibir a atividade da NADPH oxidase e a agregação de plaquetas. Isto pode explicar o uso do medicamento para o tratamento de vários distúrbios microcirculatórios. Também foram observadas propriedades anti-inflamatórias dos principais ingredientes SaB, tanshinone IIA (Tansh), e ácido protocatequínico prevenindo a expressão de moléculas adesivas, citocinas, quimiocinas, e plaquetas P-selectina . Além disso, a Danshen foi capaz de proteger as células endoteliais das veias umbilicais humanas (HUVECs) e melhorar suas funções. Seus principais componentes, ácido rosmarínico, ácido litospérmico, SaB, ácido salvianólico C (SaC), D (SaD) e H/I (SaHI), também possuem potencial antiplaquetário .

É bem conhecido que as mudanças nos níveis de vários parâmetros bioquímicos estão direta ou indiretamente associadas com o risco de ocorrência de CHD. Em primeiro lugar, o colesterol lipoproteico de baixa densidade (colesterol LDL) é um importante fator de risco para a ocorrência de CHD e a concentração deve ser bem controlada para reduzir a incidência de CHD , enquanto a concentração de colesterol lipoproteico de alta densidade (colesterol HDL) está fortemente e inversamente associada ao risco de CHD . Uma correlação com a ocorrência desta doença também foi observada com as mudanças nos níveis de colesterol total (CT) e triglicérides (TG), bem como no caso das apolipoproteínas A (ApoA), B (ApoB), E (ApoE) e lipoproteínas (a) (Lp(a)). Os marcadores de função hepática como γ-glutamil transpeptidase (GGT) , bilirrubina total (TBil) , bilirrubina indireta (IBil) e bilirrubina direta (DBil) também estão relacionados ao risco de CHD. Além disso, o nível sérico de ácido úrico, um dos marcadores da função renal, também pode refletir a gravidade da CHD. Além disso, a alta concentração de homocisteína (Hcy) é considerada um fator de risco para doenças cardiovasculares .

Estudos clínicos gerais também mostraram efeitos positivos no campo dos parâmetros acima mencionados, incluindo a melhoria dos padrões lipídicos de pacientes hiperlipidêmicos e propriedades protetoras em pacientes com lesão hepática ou renal . Hipotecamos que Danshen pode ser capaz de reduzir a incidência de CHD melhorando esses índices bioquímicos (perfil lipídico, marcadores de função renal e hepática e Hcy) de pacientes com CHD. Portanto, um estudo prospectivo, randomizado e controlado por placebo foi realizado para investigar os efeitos do medicamento nos índices bioquímicos de pacientes com CHD e explorar os possíveis mecanismos de suas funções.

2. Métodos

2.1. Pacientes

Antes do estudo, todos os protocolos foram aprovados pelo comitê de ética humana do Hospital Afiliado da Universidade de Changchun de Medicina Tradicional Chinesa. O estudo foi conduzido de acordo com os princípios da Declaração de Helsinque. Todos os pacientes assinaram os consentimentos informados antes de serem inscritos neste estudo. De março de 2011 a junho de 2012, 432 pacientes de CHD compareceram ao nosso hospital. Um total de 126 pacientes preencheram os critérios de inclusão e foram considerados para a inscrição no estudo.

2,2. Critérios de inclusão

Critérios de inclusão foram dados de acordo com diretrizes para o tratamento de pacientes com infarto do miocárdio. Todos os pacientes devem apresentar um dos seguintes sintomas clínicos: (1) angina instável; (2) infarto do miocárdio com elevação do ST (STEMI) e não-STEMI; (3) pacientes submetidos à cirurgia de revascularização miocárdica (RM); (4) pacientes submetidos à intervenção coronariana percutânea (ICP); pacientes submetidos ao stent coronário-arterial; (5) ICC determinada pela angiografia.

2,3. Os critérios de exclusão

Critérios de exclusão foram determinados de acordo com relatos anteriores . Foram utilizados os seguintes critérios de exclusão: (1) gravidez e lactação; (2) insuficiência renal com nível de creatinina > 3 mg/dL; (3) mieloma múltiplo; (4) histórico de hipersensibilidade; (5) choque cardiogênico ou fração de ejeção do ventrículo esquerdo < 40%; (6) pacientes submetidos a transplantes cardíacos; (7) pacientes submetidos a terapia de ressincronização cardíaca (TRC); (8) tendo desfibriladores implantáveis (CDI); (9) dificuldade de comunicação e outros motivos.

2.4. Grupos

Componentesanshen foram extraídos por etanol e a qualidade foi controlada de acordo com o padrão projetado pela China State Food and Drug Administration (http://www.sda.gov.cn/WS01/CL1236/114286.html). Os principais conteúdos dos extratos de etanol são tanshinone IIA, cryptotanshinone, tanshinone I , ácido rosmarínico e ácido salvianólico B . Danshen pills foram os extratos de S. miltiorrhiza e fornecidos como 27 mg/pílula por Tianjin Tasly Group Co., Ltd (Tianjin, China). O comprimido Danshen é composto por 0,28% de tanshinone IIA, 0,21% de criptotanshinone, 0,04% de tanshinone I, 1,2% de ácido rosmarínico, 5,8% de ácido salvianólico B e a maioria do amido. Após a seleção dos critérios de inclusão e exclusão, os 126 pacientes finais foram distribuídos de forma uniforme e aleatória em dois grupos: grupo Danshen e grupo controle. Cada pessoa foi designada a um grupo usando uma planilha eletrônica com o número indicado. Para evitar a cegueira deste estudo, foi adicionado um período de três meses de execução. Durante esse período, todos os pacientes foram tratados como habitualmente. Entretanto, para manter os resultados estáveis, as mudanças de estilo de vida e a ingestão diária de calorias alimentares foram desencorajadas. Os pacientes com CHD em ambos os grupos tiveram visitas presenciais ou contato telefônico em cada semana. Os índices bioquímicos foram mantidos constantes entre dois grupos após 3 meses de run-in e, em seguida, entraram no período de tratamento com Danshen.

Após três meses de run-in, os pacientes receberam 10 comprimidos Danshen/tempo no grupo Dashen, enquanto os pacientes controle receberam comprimidos placebo, três vezes ao dia. Entretanto, todos os pacientes receberam a terapia normal como no período de run-in e as mudanças no estilo de vida e na ingestão diária de calorias foram desencorajadas. Os pacientes com CHD em ambos os grupos tiveram visitas pessoais ou contato telefônico em cada semana. A duração do acompanhamento foi de 3 meses.

2,5. A medida dos índices bioquímicos

Amostras de sangue foi obtida da veia antecubital de cada paciente no dia da inscrição, após um período de 3 meses de internação, e 3 meses de administração de Danshen ou placebo. O soro foi separado do sangue venoso periférico (4 mL) após centrifugação a 4°C a 3000 rpm durante 10 min. Os índices bioquímicos foram medidos, incluindo perfis lipídicos (LDL-C, TC, TG, HDL-C, ApoA, ApoB, ApoE e Lp(a)), marcadores de função hepática (GGT, TBil, IBil e DBil), marcador de função renal (UA) e um fator de risco para doença cardiovascular (Hcy).

Todos os kits estavam comercialmente disponíveis. O Kit BioAssay ELISA (Humano) de baixa densidade de colesterol lipoproteico (LDL-C), Cat. número 196116, era de Beijing Huamei Scientific (Beijing, China). O HDL-C, Kit ELISA, Cat. número CSB-E08954h, era de Cusabio Biotech Co., Ltd (Wuhan, China). O Kit ELISA de colesterol total humano (TC), Cat. número QY-E00062, era da Qayee Bio-Technology Co., Ltd (Xangai, China). Human TG (Triglicérido) Kit ELISA, Cat. número E-EL-H5437, foi da Elabscience Biotechnology Co., Ltd (Pequim, China). Lipoproteína A (ApoA) Human ELISA Kit, Cat. Número ab108878, Apolipoprotein B (ApoB) Human ELISA Kit, Cat. número ab108807, e Apolipoprotein E (ApoE) Human ELISA Kit, Cat. número ab108813, eram da Abcam Trading (Shanghai) Company, Ltd (Shanghai, China). O Kit ELISA para Lipoprotein (a), Lp(a), Cat. número SEA842Hu, era da Wuhan USCN Business Co., Ltd (Wuhan, China). A gama-glutamil transpeptidase humana, GGT ELISA Kit, Cat. número E1375h, era da Everlight Biotech (Taipei, Taiwan). Total Bilirrubin, Humano, Kit ELISA, Cat. número E01T0143, foi da ARP American Research Products, Inc (Waltham, MA, EUA). Bilirubin (Total e Direto) Colorimetric Assay Kit, Cat. número K553-100, foi da BioVision, Inc (Milpitas, CA, EUA). Uric Acid Assay Kit, Cat. número KA1651, era da Anova Corporation (Taipei, Taiwan). Human Homocysteine (HCY) ELISA Kit, Cat. número, foi de Flarebio Biotech (Wuhan, China).

Just como em um período de run-in, a fim de evitar as variações nos índices bioquímicos por causa da terapia normal, as mudanças na ingestão diária de calorias alimentares, e estilo de vida, todas estas mudanças foram desencorajadas no período de tratamento de três meses. Após três meses de seguimento, os índices bioquímicos séricos foram medidos em todos os dados disponíveis. Essas variáveis ainda incluem perfis lipídicos séricos (LDL-C, HDL-C, TC, TG, ApoA, ApoB, ApoE e Lp(a)); marcadores séricos de função hepática, GGT, TBil, IBil e DBil; marcador sérico de função renal, UA, e fator de risco CHD, Hcy.

2,6. Análise estatística

Um total de 126 pacientes (63 em cada grupo) forneceu 90% de potência para detectar a diferença entre dois grupos com um nível alfa fixado em 0,05. Todos os dados foram apresentados como valores médios ± DP. Foram aplicados o teste do qui-quadrado e o -teste. A análise de variância foi utilizada para comparar os níveis séricos de lipídios na linha de base e após o período de tratamento de 3 meses em cada grupo. (2-tailed) serão considerados como estatisticamente significativos. A análise foi realizada utilizando o SPSS versão 20.0 (IBM corporation; Chicago, IL, EUA).

3. Resultados

3.1. Caráteres básicos de pacientes com CHD

Um total de 432 pacientes atendidos em nosso hospital de março de 2011 a junho de 2012. Destes pacientes, 306 pacientes com DCC foram excluídos após seleção com critérios de inclusão e exclusão (Figura 1). Antes da administração da Danshen, foi realizado um período de 3 meses para garantir que não houvesse mudança significativa nos índices bioquímicos, embora alguns desses pacientes ainda estejam tomando o medicamento para terapia de CHD. Assim, 126 pacientes foram selecionados e distribuídos aleatoriamente em dois grupos: o grupo Danshen () e o grupo controle (). Após mais 3 meses de seguimento, 61 e 62 pacientes com DCC terminaram o estudo nos grupos Danshen e controle, respectivamente.

Figura 1

O fluxograma deste estudo. CHD, doença coronária. As mudanças para a terapia normal, estilo de vida e ingestão diária de calorias foram desencorajadas nos períodos de tratamento de três meses e de três meses. Finalmente, 61 e 62 pacientes com CHD concluíram todo o procedimento. Os comprimidos Danshen foram os extractos de Salvia miltiorrhiza e fornecidos como 27 mg/pílula por Tianjin Tasly Group Co., Ltd (Tianjin, China).

Não houve diferença significativa para as características clínicas e processuais entre a Danshen e os grupos de controlo (Tabela 1) (), incluindo idade, sexo, elemento de risco, apresentação clínica, resultados laboratoriais pré-procedimento, e medicação. Havia 26 (41,3%) e 24 (38,1%) homens nos grupos Danshen e controle, respectivamente. A idade de todos os pacientes com DCC variou de 60,2 a 73,5 anos. A maioria dos pacientes com CHD apresentava angina instável com 37 casos (58,7%) no grupo Danshen e 34 casos (54,0%) no grupo controle. Mais da metade dos pacientes apresentava sobrepeso de acordo com os valores de IMC (sobrepeso = IMC de 25-29,9) em ambos os grupos. A hipertensão arterial foi um sintoma óbvio com 48 casos (76,2%) no grupo Danshen e 50 casos (79,4%) no grupo controle.

3,2. Índices bioquímicos na linha de base

Índices bioquímicos do soro foram analisados em todos os dados disponíveis, para principalmente identificar essas variáveis associadas ao risco de CHD. Essas variáveis incluem perfis lipídicos séricos (LDL-C, HDL-C, TC, TG, ApoA, ApoB, ApoE e Lp(a)); marcadores séricos de função hepática, GGT, TBil, IBil e DBil; marcador sérico de função renal, fator de risco UA e CHD, e Hcy. Todos os índices bioquímicos séricos entre os grupos Danshen e controle foram estatisticamente insignificantes () (Tabela 2).

3.3. Índices Bioquímicos após o período de execução de 3 meses

Para evitar as variações nos índices bioquímicos devido à terapia normal, às mudanças na ingestão diária de calorias alimentares e no estilo de vida, é necessário adicionar um período de execução de 3 meses para garantir as variações. Entretanto, todas estas mudanças foram desencorajadas. Após um período de três meses, foram medidos índices bioquímicos séricos em todos os dados disponíveis, que estão associados ao risco de CHD. Essas variáveis ainda incluem perfis lipídicos séricos (LDL-C, HDL-C, TC, TG, ApoA, ApoB, ApoE e Lp(a)); marcadores séricos de função hepática, GGT, TBil, IBil e DBil; marcador sérico de função renal, UA e fator de risco CHD, e Hcy. Os resultados também mostraram que não houve diferença estatística significativa para esses índices bioquímicos séricos entre os grupos Danshen e controle após um período de três meses (Tabela 3) ().

3.4. Análise dos índices bioquímicos após três meses de administração de Danshen

Após três meses de seguimento, duas pessoas abandonaram o grupo Danshen e um paciente abandonou o grupo controle. Assim, 61 e 62 pacientes terminaram o estudo nos grupos Danshen e controle (Figura 1), respectivamente. O tratamento de Danshen reduziu os níveis de TG, TC, LDL-C, Lp(a), GGT, DBil, UA e Hcy dos valores medianos (mg/dL) 114, 190, 113, 32, 3,3 (IU/dL), 0,4, 5,1 e 2,3 (Tabela 3) para valores medianos (mg/dL) 101, 155, 98, 8, 1,6 (IU/dL), 0,2, 4,5 e 14 (Tabela 4), respectivamente (). Em contraste, o tratamento Danshen aumentou os níveis de HDL-C, ApoA, ApoB, ApoE, TBil e IBil de valores medianos (mg/dL) 55, 98, 76, 7,0, 0,5 e 0,5 (Tabela 3) para valores medianos (mg/dL) 62, 119, 93, 8,7, 0,8 e 0,6 (Tabela 4), respectivamente (). Entretanto, houve diferenças estatísticas significativas para esses índices bioquímicos entre os grupos Danshen e controle após três meses de acompanhamento (Tabela 4) (). Comparativamente, não houve diferença estatística significativa para estes parâmetros bioquímicos nos grupos de controle entre os períodos de rodagem e tratamento (Tabelas 3 e 4) ().

4. Discussão

A MTC Danshen tem sido há muito considerada eficaz em “activar a circulação e dispersar a estase sanguínea” . De acordo com a teoria clássica da MTC, tem sido dito que “a dor será aliviada quando o bloqueio for removido”. O conceito sugere que a baixa circulação sanguínea irá causar danos aos tecidos e órgãos humanos. Assim, tal teoria pode ser usada para o tratamento de CHD.

Avaliamos a eficácia terapêutica da Danshen, que está associada às alterações dos perfis lipídicos em pacientes com CHD. Foram medidos múltiplos marcadores de índices bioquímicos de pacientes com CHD no soro. Os resultados indicaram que a presença de Danshen pode causar uma melhora de vários índices bioquímicos estudados de pacientes com CHD. Os níveis de TG, TC, LDL-C, Lp(a), GGT, DBil, AU e Hcy foram estatisticamente reduzidos (, resp.) (Tabelas 3 e 4), enquanto os níveis de HDL-C, ApoA, ApoB, ApoE, TBIL e IBil foram significativamente elevados (Tabelas 3 e 4), (, resp.). A maioria destes resultados está de acordo com relatórios anteriores.

Danshen foi capaz de melhorar a função hepática aumentando o nível de bilirrubina total e reduzindo o nível de UA em voluntários . Hcy é um subproduto do metabolismo da metionina e seu desequilíbrio resultará em hiperhomocysteinemia , responsável pelo desenvolvimento de CHD . O extrato de S. miltiorrhiza também inibiu os efeitos adversos indesejáveis para os HUVECs . Todos estes resultados sugerem que o medicamento pode melhorar as funções cardíacas e é um medicamento potencial na terapia de CHD.

Danshen foi comprovado para suprimir a ingestão de lipoproteína de baixa densidade, aumentar a expressão da molécula de adesão intercelular e modular eventos chave na aterosclerose . A combinação do medicamento e Gegen pode melhorar as proporções de TG/HDL-C e LDL-C/HDL-C . As principais composições em Danshen podem ser benéficas para a melhoria dos perfis lipídicos. Cryptotanshinone mostrou efeitos protetores na aterosclerose de camundongos deficientes em ApoE e pode melhorar a situação causada pela falta de apolipoproteína , que também foi capaz de inibir a expressão de moléculas de adesão oxidada induzida por LDL . Tanshinone IIA mostrou efeitos necrófagos sobre os radicais livres de lipídios no retículo sarcoplasmático cardíaco e inibiu a expressão de lipoproteínas de baixa densidade oxidadas receptor-1 . O extrato de etanol de S. miltiorrhiza aumentou o nível sérico in vivo de HDL para prevenir a ocorrência de osteoporose . A prevenção da peroxidação lipídica também foi observada no caso de seu ácido composto ativo-rosmarínico . Todas estas composições podem ser benéficas para a melhoria do perfil lipídico de pacientes com CHD.

A incidência de CHD difere amplamente entre diferentes estudos. A determinação do grau de correlação entre os perfis de risco e a prevalência de fatores dos pacientes com CHD é freqüentemente muito complicada, especialmente nos pacientes com doenças coocorrentes como hipertensão arterial, diabetes mellitus, doenças renais e outros, tornando tais resultados mais variáveis. Outras atividades também podem piorar a incidência de CHD, como o estresse oxidativo e a produção de citocinas pró-inflamatórias. Assim, a prevenção dessas doenças e desses processos pode melhorar o resultado clínico dos pacientes com CHD. Mais importante ainda, a progressão da CHD pela Danshen parece depender de suas múltiplas funções e os efeitos benéficos foram demonstrados em vários estudos. Por exemplo, o medicamento tem os principais componentes com atividades antioxidantes , que podem prevenir lesões vasculares . Possui propriedades anti-inflamatórias, inibe a agregação de plaquetas, previne trombose, reduz a viscosidade do sangue e melhora a isquemia miocárdica. Todos estes resultados sugerem que Danshen é superior à maioria dos medicamentos atuais com múltiplas atividades, que são benéficas para melhorar os sintomas da DC. Entretanto, aqui, consideramos apenas a Danshen melhorando o perfil lipídico dos pacientes com CHD. Muito trabalho precisa ser feito para entender melhor sua função para melhorar a gravidade da DC.

Deve ser enfatizado que os valores dos resultados obtidos mesmo com a limitação do estudo clínico podem ter impacto; por exemplo, (1) o tamanho da amostra parece pequeno apenas com 126 pacientes com DC selecionados, o que é causado pelos critérios rigorosos dados neste estudo; (2) todo o período de acompanhamento é de 6 meses, enquanto o período para administração de Danshen é de apenas três meses. Num período tão curto, a redução da morte cardíaca e da insuficiência cardíaca não pode ser detectada; (3) a segurança do medicamento não é identificada, embora tenha sido amplamente utilizado clinicamente na China. Nossos resultados devem ser contados como promissores, embora preliminares. Muito mais evidências são necessárias para apoiar o uso clínico de Danshen para pacientes com insuficiência cardíaca.

5. Conclusão

Danshen foi capaz de melhorar os índices bioquímicos dos pacientes com CHD. Em uma análise exploratória pré-especificada, houve evidência de uma redução na taxa de eventos de CHD entre os pacientes que haviam recebido a terapia medicamentosa. Atualmente, é o fármaco fitoterápico chinês mais popular e é frequentemente usado sozinho ou em combinação com outros medicamentos, especialmente para as terapias de doenças cardiovasculares. Os resultados de nosso estudo refletem a tendência global de estudos no campo do papel da Danshen no desenvolvimento da terapia para pacientes com DCC.

Interesses Concorrentes

Os autores declaram que não há interesses concorrentes em relação à publicação deste artigo.

Acreditos

Os autores agradecem à Dra. Wang pela assistência técnica durante a coleta de dados.