Rozważ możliwość zakażenia M pneumoniae u pacjentów w każdym wieku, którzy zgłaszają się z zakażeniami dróg oddechowych. Badania laboratoryjne powinny skupiać się zarówno na chorobie klinicznej (np. zapalenie tchawicy i oskrzeli vs zapalenie płuc), jak i na wielu możliwych etiologiach zakaźnych, które mogą powodować klinicznie podobne objawy. Zakres badań laboratoryjnych powinien również odzwierciedlać ciężkość choroby oraz to, czy choroba uzasadnia hospitalizację.

W aż połowie przypadków środowiskowych zapaleń płuc nigdy nie udaje się ustalić etiologii mikrobiologicznej, mimo wykonania odpowiednich badań laboratoryjnych. Typowa łagodna choroba wywołana przez M pneumoniae u zdrowych osób może nie uzasadniać kompleksowego badania mikrobiologicznego, ponieważ empiryczne leczenie doustnymi lekami przeciwbakteryjnymi może objąć M pneumoniae i większość innych czynników bakteryjnych wywołujących podobne choroby.

Analiza laboratoryjna

Dwudzieści pięć procent pacjentów ma leukocytozę; u pozostałych liczba leukocytów mieści się w zakresie referencyjnym.

Pacjenci mogą mieć podwyższony OB.

Odczyn komórkowy plwociny jest jednojądrowy, bez bakterii widocznych przy barwieniu metodą Grama.

Około 75% pacjentów ma miano zimnej aglutyniny co najmniej 1:32 do drugiego tygodnia choroby, zanikające do 6-8 tygodnia. Nie jest to specyficzny test na zakażenie M pneumoniae, ale im większe jest miano zimnych aglutynin (>1:64) u pacjenta z zapaleniem płuc nabytym we wspólnocie, tym bardziej prawdopodobne jest, że zimne aglutyniny są spowodowane przez M pneumoniae. Nie jest prawdopodobne wystąpienie specyficznych zaburzeń czynności wątroby lub nerek.

W celu potwierdzenia zakażenia mykoplazmami dróg oddechowych konieczna jest hodowla, badania molekularne i (lub) badania serologiczne.

Hodowla

Próbki z dróg oddechowych nadające się do hodowli obejmują wymazy z gardła, plwocinę, aspirat z tchawicy, płyn z płukania oskrzeli, płyn z opłucnej lub tkankę z biopsji płuc, w zależności od stanu klinicznego pacjenta.

Drobnoustroje z rodzaju mykoplazm mają duże wymagania co do wzrostu i często są trudne i powolne do hodowli in vitro. Podczas pobierania próbek należy zadbać o inokulację na odpowiednie podłoże transportowe (np. bulion SP4 lub uniwersalne podłoże transportowe), w miarę możliwości przy łóżku pacjenta i nie dopuszczać do wysuszenia. Klinicyści zalecają zamrażanie w temperaturze -70°C, jeśli próbki nie mogą być przetransportowane do laboratorium diagnostycznego natychmiast po pobraniu.

Wzrost w hodowli jest powolny, w niektórych przypadkach wymaga 3 tygodni lub dłużej, a hodowla nie jest wyjątkowo czuła w wykrywaniu zakażenia M pneumoniae. Podłoże hodowlane jest często niedostępne, z wyjątkiem wyspecjalizowanych laboratoriów referencyjnych. W przypadku próby wykonania posiewu należy również wykonać procedury alternatywne, w tym serologię i/lub molekularne testy amplifikacji kwasów nukleinowych.

Badania serologiczne

Do potwierdzenia zakażenia M pneumoniae lekarze najczęściej stosują badania serologiczne, mimo że testy te wiążą się z istotnymi problemami.

Wielu klinicystów woli testy immunoenzymatyczne od starszych, mniej czułych testów odczynu wiązania dopełniacza i niespecyficznych testów miana zimnej aglutyniny. Tego typu testy są szeroko dostępne w komercyjnych laboratoriach referencyjnych.

Ponieważ pierwotne zakażenie nie gwarantuje odporności ochronnej przed przyszłymi zakażeniami, a resztki immunoglobuliny G (IgG) mogą pozostać po wcześniejszych spotkaniach z organizmem, eksperci dali duży impuls do opracowania czułych i specyficznych testów, które mogą rozróżnić ostre i odległe zakażenie.

Definitywna diagnoza wymaga serokonwersji udokumentowanej przez sparowane próbki uzyskane w odstępie 2-4 tygodni. Chociaż niektórzy badacze twierdzą, że pojedyncze miana immunoglobuliny M (IgM) lub immunoglobuliny A (IgA) ujawniają aktualne zakażenie, u niektórych osób IgM może utrzymywać się do kilku miesięcy, a wielu dorosłych może nie wykazywać wykrywalnej odpowiedzi IgM. Dlatego opieranie się na pojedynczym badaniu serologicznym może być klinicznie mylące, a eksperci zalecają oparcie diagnozy ostrego zakażenia na serokonwersji mierzonej jednocześnie w testach zarówno dla IgM jak i IgG. Stosowanie badań serologicznych w diagnostyce zakażenia mykoplazmami jest uzasadnione tylko wtedy, gdy pacjent ma wystarczającą zdolność humoralnego układu odpornościowego do wytworzenia odpowiedzi przeciwciał.

Szybkie diagnostyczne testy immunoenzymatyczne

Jednym z najbardziej znaczących postępów w ostatnich latach w diagnostyce zakażeń dróg oddechowych wywołanych przez M pneumoniae jest opracowanie jakościowych, szybkich, jednoskładnikowych, opartych na membranach testów immunoenzymatycznych, które można łatwo zaadaptować w laboratorium gabinetu lekarza podstawowej opieki zdrowotnej.

System testowy Remel IgG/IgM Antibody (Thermo-Fisher) mierzy jednocześnie IgG i IgM.

Karta Meridian ImmunoCard (Meridian Bioscience, Inc.) mierzy tylko IgM.

Lekarze mogą wykonywać oba testy bez specjalnego doświadczenia lub sprzętu i mogą zinterpretować wyniki w ciągu około 10 minut, eliminując potrzebę zbierania sparowanych surowic do późniejszego pomiaru przeciwciał, chociaż czasami uzyskuje się błędne wyniki, gdy analizowane są tylko pojedyncze próbki surowicy.

Oba testy mają klasyfikację umiarkowanej złożoności zgodnie z poprawką CLIA (Clinical Laboratory Improvement Amendment), co pozwala wielu lekarzom na oferowanie testów serologicznych na obecność przeciwciał M pneumoniae jako testów w punktach opieki, tak aby można je było wykorzystać do bezpośredniego prowadzenia pacjenta.

Takie testy jednopróbkowe mają ograniczenia opisane powyżej; być może najbardziej praktyczne zastosowanie karty IgM ImmunoCard jest wtedy, gdy podejrzewa się ostre zakażenie M pneumoniae u dzieci i młodych dorosłych.

Analiza molekularna

Badacze opracowali systemy oparte na badaniach molekularnych do wykrywania M pneumoniae przy użyciu łańcuchowej reakcji polimerazy (PCR) lub innych technologii. Opisano wiele różnych celów genowych dla testów PCR do wykrywania M pneumoniae w próbkach klinicznych. Tradycyjna metoda PCR jest stopniowo zastępowana przez ilościowe testy PCR w czasie rzeczywistym. Ostatnie publikacje wskazują, że gen toksyny CARDS jest bardziej czuły w wykrywaniu M pneumoniae niż testy ukierunkowane na białko P1 lub geny ATPazy.

Niektóre laboratoria referencyjne oferują testy PCR, które same opracowały do wykrywania aktualnego zakażenia mykoplazmami. Dwa testy oparte na badaniach molekularnych do wykrywania M pneumoniae są obecnie zatwierdzone przez FDA do użytku w Stanach Zjednoczonych. Jednym z nich jest test illumigene Mycoplasma (Meridian Bioscience, Inc.). Ten test LAMP (loop-mediated isothermal amplification) umożliwia wykrywanie M pneumoniae w maksymalnie 10 próbkach klinicznych, które mogą być badane jednocześnie w ciągu jednej godziny po umieszczeniu wyekstrahowanego DNA w inkubatorze/czytniku. Wielokrotny test Biofire Diagnostics FilmArray RP wykrywa kwasy nukleinowe w wymazach z jamy nosowo-gardłowej dla 20 patogenów dróg oddechowych, w tym M pneumoniae, przetwarzając jedną próbkę na raz i uzyskując wyniki w ciągu około godziny .

Przewożenie mykoplazm w górnych drogach oddechowych przez różne okresy po wcześniejszym zakażeniu może utrudnić interpretację pojedynczego pozytywnego wyniku testu PCR. Ponadto badanie PCR może ujawnić bardzo małą liczbę organizmów, które mogą nie mieć znaczenia etiologicznego.

Nie ustalono swoistego progu ilości mykoplazm w drogach oddechowych, który pozwala odróżnić kolonizację od zakażenia, dlatego bardzo czuła metoda wykrywania, taka jak PCR, wykonywana w sposób nieilościowy, może przecenić znaczenie kliniczne M pneumoniae jako patogenu, ponieważ często współwystępuje z innymi bakteryjnymi i wirusowymi patogenami układu oddechowego. Z tych powodów, dla uzyskania maksymalnej dokładności diagnostycznej, oznaczeniom molekularnym mogą towarzyszyć oznaczenia serologiczne, chyba że badany jest normalnie sterylny płyn ustrojowy, w którym obecność dowolnej liczby mykoplazm byłaby uznana za dowód choroby. Nowsze ilościowe testy PCR w czasie rzeczywistym w pewnym stopniu łagodzą ten problem.

Zważywszy na znaczne ograniczenia serologii, wydłużony czas realizacji i brak wrażliwości hodowli oraz rosnącą dostępność szybkiej diagnostyki zakażenia mykoplazmami u pacjentów z objawami za pomocą testów molekularnych, testy molekularne są obecnie preferowaną metodą diagnostyki zakażenia M pneumoniae, jeśli są dostępne dla lekarzy podstawowej opieki zdrowotnej za pośrednictwem szpitala lub laboratorium referencyjnego.

.