Cervical Infection with Herpes simplex Virus, Chlamydia trachomatis, and Neisseria gonorrhoeae among Symptomatic Women, Dubai, UAE: A Molecular Approach
Abstract
Tragicznie, infekcje dróg płciowych są nadal poważnym problemem zdrowia publicznego w wielu regionach. Niniejsze badanie zostało podjęte w celu określenia częstości występowania infekcji szyjki macicy wirusem Herpes simplex (HSV), Chlamydia trachomatis (CT) i Neisseria gonorrhoeae (NG) wśród zamężnych kobiet zgłaszających się do Iranian Hospital, Dubaj, Zjednoczone Emiraty Arabskie. W retrospektywnym badaniu przekrojowym wzięło udział 201 pacjentek w wieku 16-80 lat, które w 2010 roku zgłosiły się na Oddział Położnictwa i Ginekologii Szpitala Irańskiego w Dubaju, w Zjednoczonych Emiratach Arabskich. Pacjentki podzielono na trzy grupy wiekowe: 15-30 lat (grupa I), 31-40 lat (grupa II) i 41 lat (grupa III). Od każdej kobiety pobrano próbkę wymazu z szyjki macicy i metodą PCR określono częstość występowania zakażenia HSV, CT i NG. HSV, CT i NG wykryto odpowiednio w 6,5%, 10,4% i 5,5% próbek wymazów. Pod względem wieku zauważono istotną różnicę w częstości występowania NG i HSV pomiędzy grupami I i III. Ze względu na znaczenie chorób przenoszonych drogą płciową (STD) dla zdrowia publicznego, ich długotrwały wpływ na jakość życia oraz ich obciążenie ekonomiczne, działania prewencyjne i edukacja kobiet wydają się konieczne.
1. Wprowadzenie
Tragicznie, infekcje dróg płciowych są nadal poważnym problemem zdrowia publicznego w wielu regionach. Rocznie w Stanach Zjednoczonych odnotowano ponad 15 milionów nowych przypadków chorób przenoszonych drogą płciową (STD). Wśród kobiet, niektóre z nich mogą prowadzić do długotrwałych chorób zapalnych miednicy, niepłodności, ciąż pozamacicznych, dyspareunii i raka szyjki macicy. Każdego roku ponad połowa wszystkich nowych przypadków STD występuje u młodych osób w wieku od 15 do 24 lat. Ponadto, w młodych i dorastających kobiet, mogą one spowodować depresję, niskie wsparcie społeczne, i wybitny stres .
Większość STD, takich jak Herpes simplex virus (HSV), Chlamydia trachomatis (CT), i Neisseria gonorrhoeae (NG) okazały się być bezobjawowe u kobiet . Opryszczka narządów płciowych jest powszechnie uważana za przewlekłą chorobę weneryczną zarówno w krajach rozwiniętych, jak i rozwijających się, charakteryzującą się znaczną zachorowalnością. Infekcja jest spowodowana przez dwa typy wirusa, w tym HSV-2 (głównie) i HSV-1 (czasami), a ich rozpowszechnienie i częstość występowania wzrosła w ciągu ostatnich trzech dekad.
CT infekcja jest najczęstszą przyczyną bakteryjnej STD na świecie, zwłaszcza u młodych kobiet. Infekcja jest bezobjawowa w większości przypadków i może być przekazywana podczas pochwy, oralny lub analny kontakt seksualny i mogą być przekazywane przez matkę do noworodka zbyt .
Gonorrhea jest spowodowane przez NG i ten patogen wykazano, aby mieć potencjał do rozwoju oporności na często używane środki przeciwdrobnoustrojowe, zwłaszcza w nieleczonych pacjentów. Przypadki te mogą nadal przenosić się i ułatwiać szybkie pojawienie się oporności na środki przeciwdrobnoustrojowe. Zapadalność na tę chorobę jest wysoka, dlatego diagnostyka zarówno zakażeń objawowych, jak i bezobjawowych ma ogromne znaczenie .
W ostatnich latach zestawy do szybkiego wykrywania i pałeczki dipstic były stosowane jako powszechne, wygodne i szybkie metody badań przesiewowych w kierunku STD. Jednakże nowe metody molekularne, takie jak PCR, jakościowa i ilościowa PCR w czasie rzeczywistym oraz hybrydyzacja DNA zostały wprowadzone jako bardziej wiarygodne techniki w diagnostyce szerokiej gamy STD w porównaniu z metodami serologicznymi. Co więcej, monitorowanie poziomu DNA patogenu w płynach ustrojowych może ujawnić status choroby, jej odpowiedź na leki oraz wzorce oporności .
W Dubaju, ZEA, styl życia jednostek uległ zmianie. Ponadto, wielu pracowników migrujących lub inwestorów zostały przyciągnięte z ponad 100 krajów z Azji, Afryki, Europy, i tak dalej do tego miasta. Ponieważ Dubaj jest 8. najczęściej odwiedzanym przez turystów miastem na świecie i do 2015 r. przyciągnął ponad 15 mln turystów z różnych krajów, choroby weneryczne mogą stanowić problem dla zdrowia publicznego w Dubaju, ZEA. Badania przesiewowe w kierunku STD w populacji Dubaju mogą być pierwszym i bardzo ważnym krokiem w zarządzaniu problemem zdrowia publicznego. Celem tego badania było określenie częstości występowania infekcji szyjki macicy HSV, CT i NG wśród mężatek zgłaszających się do irańskiego szpitala, Dubaj, Zjednoczone Emiraty Arabskie.
2. Podmioty i metody
2.1. Study Population
The study involved 201 female patients aged 16-80 years old ( years) who referred to Obstetrics and Gynecology Department of Iranian Hospital, Dubai, in 2010 with symptoms such as itching in genital area, dyspareunia, dysuria, or abnormal vaginal discharges. Pacjentki pochodziły z różnych narodowości (Tabela 1) i wszystkie były zamężne. Pacjentki podzielono na trzy grupy wiekowe: 15-30 lat (grupa I), 31-40 lat (grupa II) i ≥41 lat (grupa III). Próbka wymazu z szyjki macicy została pobrana od wszystkich pacjentek za pomocą sterylnych wymazówek i została przekazana w podłożu do transportu wirusów do Professor Alborzi Clinical Microbiology Research Center, Nemazee Hospital, Shiraz, Iran, w celu przeprowadzenia dalszych badań. Badanie zostało zatwierdzone w Office of Education and Research of Iranian Hospital, Dubai.
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2.2. Ekstrakcja DNA
DNA ekstrahowano z próbek wymazów w 200 μL podłoża do transportu wirusów za pomocą Invisorb spin virus DNA Mini Kit (Invitek, Berlin, Niemcy) zgodnie z protokołem producenta. W celu wykrycia CT, do zestawu buforu lizującego dodawano standaryzowaną ilość wewnętrznego kontrolnego DNA, dostarczanego z zestawem real time PCR, aby monitorować wydajność ekstrakcji. Kontrole negatywne i pozytywne były włączone do procesu ekstrakcji.
2.3. Ilościowa PCR w czasie rzeczywistym do wykrywania HSV i CT
Ilościowa PCR w czasie rzeczywistym została przeprowadzona przy użyciu par primerów oligonukleotydowych i sond specyficznych dla regionu glikoproteiny B (gB) HSV1 i HSV2, jak podano wcześniej. Użyto starterów HSVFP (5′TCC CGG TAC GAA GAC CAG3′) i HSVRP (5′AGC AGG CCG CTG TCC TTG3′), a sondą był HSVTCP (5′FAMTGG TCC TCC AGC ATG GTG ATG TTG/C AGG TCGTAMRA3′). Reakcję przeprowadzono według następującego protokołu: 2 min inkubacji w 50°C dla aktywacji AmpErase, 10 min w 95°C dla aktywacji polimerazy i przez 45 cykli, 15 sekund w 94°C dla denaturacji i 60 sekund w 58°C dla wyżarzania, przedłużania i zbierania danych. Każde 50 μL mieszaniny PCR zawierało 10 μL oczyszczonego DNA, 840 nM stężenia każdego primera i 100 nM sondy w 1x TaqMan universal PCR master mix (Applied Biosystems, Branchburg, New Jersey, USA).
Do wykrywania CT przeprowadzono ilościową PCR w czasie rzeczywistym z parami primerów oligonukleotydowych i sondą specyficzną dla genomu CT za pomocą Advanced Kit (PrimerDesign Ltd., Millbrook Technology Campus, South Hampton, UK). Amplifikację przeprowadzono przy użyciu odczynników TaqMan universal real time PCR master mix (Roche, Branchburg, New Jersey, USA). Przeprowadzono ją według następującego czteroetapowego protokołu: 2 min inkubacji w 50°C dla aktywacji AmpErase, 10 min w 95°C dla aktywacji polimerazy i przez 45 cykli, 10 sekund w 95°C dla denaturacji i 60 sekund w 60°C dla annealingu, przedłużenia i zbierania danych.
Wszystkie amplifikacje przeprowadzono w maszynie Applied Biosystem Sequence Detector 7500 (Applied Biosystems, USA). Kontrole negatywne były włączone do procesu ekstrakcji pomiędzy każdymi 20 próbkami klinicznymi. Wszystkie próbki negatywne były badane dwukrotnie.
2.4. Wykrywanie NG
NG wykrywano za pomocą zestawu do detekcji PCR (CinnaGen Inc., Iran) zgodnie z protokołem producenta. Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze 94°C przez 3 minuty, a następnie inkubowano przez 35 cykli w temperaturze 94°C przez 45 sekund, 50°C przez 20 sekund i 72°C przez 30 sekund oraz przez 5 minut w temperaturze 72°C w celu dodatkowego przedłużenia. Produkty PCR analizowano na 1% żelu agarozowym.
2.5. Analiza statystyczna
Różnice w częstości występowania HSV, CT i NG pomiędzy grupami wiekowymi analizowano za pomocą testu chi kwadrat. Ponadto, związek pomiędzy HSV, CT i NG a występowaniem grzybiczo-bakteryjnego zakażenia szyjki macicy analizowano testem chi kwadrat. Całość danych analizowano przy użyciu oprogramowania SPSS (SPSS for Windows, wersja 16, SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Wszystkie wartości uznano za istotne statystycznie.
3. Wyniki
Zakażenie szyjki macicy wywołane przez Candida spp. i Coccobacilli uznano za zakażenie grzybiczo-bakteryjne z częstością 45,3% i nie-grzybiczo-bakteryjne z częstością 54,7%. HSV i CT były dodatnie odpowiednio w 13 (6,5%) i 21 (10,4%) próbkach wymazów. Liczba kopii DNA HSV mierzona metodą PCR w czasie rzeczywistym wynosiła od 3,11 × 103 do 7,18 × 105 kopii/mL w podłożu do transportu wirusów (mediana 4 × 104 kopii/mL), a liczba kopii DNA CT wynosiła od 3,48 × 103 do 7,11 × 106 kopii/mL w podłożu do transportu wirusów (mediana 3,33 × 105 kopii/mL). NG wykryto u 11 (5,5%) pacjentów.
W tabeli 2 przedstawiono częstość występowania chorób w różnych grupach wiekowych. U żadnego z pacjentów nie stwierdzono zakażeń mieszanych. Nie stwierdzono istotnych różnic w częstości występowania CT pomiędzy poszczególnymi grupami wiekowymi (). Częstość występowania NG i HSV nie różniła się istotnie pomiędzy grupami I i II oraz II i III (), natomiast istniały istotne różnice pomiędzy grupami I i III (). Ponadto różnice w częstości występowania zakażeń HSV, CT i NG nie były istotne statystycznie pomiędzy grupą grzybiczo-bakteryjnego zakażenia szyjki macicy a grupą nie-grzybiczo-bakteryjną (). Tabela 3 porównuje nasze dane z Dubaju, ZEA, dotyczące częstości występowania HSV, CT i NG z różnymi badaniami.
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4. Dyskusja
W obecnym badaniu, spośród 201 kobiet, 6,5%, 10,4% i 5,5% było zakażonych HSV, CT i NG, odpowiednio. Nasze obecne wyniki dotyczące zakażenia HSV, CT i NG są zgodne z wcześniejszymi badaniami nad rozpowszechnieniem chorób wenerycznych. Ostatnio podobne badanie wykazało obecność DNA HSV-2 u 7% z 509 kobiet w USA. Wcześniejsze badania przeprowadzone w Turcji wykazały, że 12,7% kobiet z grupy niskiego ryzyka było zakażonych CT. Gaydos i wsp. podali, że 3,8% badanej przez nich populacji kobiet było zakażonych NG .
Wcześniejsza literatura wskazywała, że większość zakażeń HSV, CT i NG może przebiegać bezobjawowo i mieć długotrwały przebieg . Podobnie w niniejszym badaniu, żadna z kobiet nie była świadoma swojego zakażenia przed poddaniem się badaniom przesiewowym, jednak pewne objawy kliniczne były widoczne. Rozpowszechnienie STD było konsekwentnie większe w populacjach wysokiego ryzyka w porównaniu z tymi, które uważane są za grupy niższego ryzyka. Powszechnie wymieniane czynniki ryzyka związane z STD obejmują stan wolny i wielu partnerów seksualnych. W Amsterdamie, w Holandii, najwyższe rozpowszechnienie HSV-1 lub HSV-2 odnotowano w najmłodszych grupach wiekowych, podczas gdy nastolatki i dorośli w wieku 20 lat mieli rozpowszechnienie odpowiednio 5,26% i 4,31%. W Peru częstość występowania zakażenia u kobiet z zakażeniem CT wynosiła 6-5%, a z zakażeniem NG 0-1%. W Korei Południowej ogólny wskaźnik wykrywalności CT wynosił 2,4%, a HSV typu II – 0,8%. U tunezyjskich kobiet świadczących usługi seksualne, CT, NG i HSV-2 PCR były pozytywne odpowiednio u 72,9%, 11,2% i 1,1% kobiet. Chociaż poprzednie badania wykazały, że młody wiek jest związany z pozytywnymi wynikami dla CT, istnieją pewne badania, które zgłosiły brak korelacji między wiekiem a występowaniem choroby. Podobnie, nasze wyniki wykazały, że nie było istotnej różnicy w częstości występowania CT pomiędzy różnymi grupami wiekowymi.
Różne badania wykazały, że częstość występowania HSV konsekwentnie wzrastała wraz z wiekiem w większości obszarów geograficznych. Zgodnie z oczekiwaniami, wyniki obecnego badania wskazały, że częstość występowania HSV była znacząco wyższa w grupie III w porównaniu z grupą I. Podobne badanie przeprowadzone w Bangladeszu wykazało, że częstość występowania przeciwciał HSV-2 była niska wśród zamężnych kobiet w wieku poniżej 20 lat. W konsekwencji częstość ta wzrastała wraz z wiekiem, co może być związane z długością okresu aktywności seksualnej u kobiet.
W przeciwieństwie do tego, nasze wyniki wykazały, że częstość występowania NG zmniejszała się wraz z wiekiem i istniała znacząca różnica w częstości występowania infekcji między grupami I i III, a infekcja była bardziej rozpowszechniona u młodych kobiet. Wynik ten jest niespójny z innym badaniem. W Nigerii zakażenie NG było częstsze u kobiet w wieku 25 lat. Badanie przeprowadzone w Chinach wśród kobiet świadczących usługi seksualne wykazało, że 8% badanej populacji było zakażonych NG, co było zbliżone do wskaźnika zakażenia u młodych kobiet. Mimo że wszystkie kobiety w niniejszym badaniu były zamężne i nie utrzymywały stosunków seksualnych poza rodziną, częstość występowania STD u tych pacjentek była wysoka. Konieczna jest jednak ocena relacji seksualnych partnera. Wcześniejsze badania przeprowadzone we Francji wykazały, że wśród 111 bezobjawowych męskich partnerów niepłodnych par, CT wykryto testami PCR COBAS AMPLICOR i serologicznymi odpowiednio u 6,3% i 4,5% pacjentów. Wydaje się zatem, że monitorowanie partnerów seksualnych jest niezbędne w profilaktyce STD.
Grzybiczo-bakteryjne zakażenie szyjki macicy stwierdzono u 45,3% badanej populacji, ale nie stwierdzono istotnych różnic w częstości występowania zakażeń HSV, CT i NG pomiędzy grupą zakażenia grzybiczo-bakteryjnego szyjki macicy a grupą zakażenia niegrzybiczo-bakteryjnego. Wykazano, że może dochodzić do mieszanych zakażeń bakteryjną lub grzybiczą waginozą i STD, takich jak HSV, CT, NG i T. vaginalis. Konieczne są dodatkowe badania w celu kompleksowej oceny roli bakteryjnego i grzybiczego zakażenia szyjki macicy w patogenezie HSV, CT, NG i innych STD. Monitorowanie chorobowości i zapadalności na STD w populacji, a zwłaszcza wśród młodzieży, pomogłoby władzom państwowym w prowadzeniu i ocenie strategii i wysiłków profilaktycznych. Ze względu na znaczny i długotrwały wpływ STD na jakość życia oraz straty ekonomiczne wynikające z wysokich kosztów leczenia, istnieje potrzeba dokładnej oceny STD na całym świecie. Jerman i wsp. podali, że w 2005 r. w Kalifornii wśród młodych pacjentów wystąpiło 1,1 mln nowych przypadków STD, a bezpośrednie koszty medyczne wyniosły 1,1 mld USD. Co więcej, objawowe STD to tylko wierzchołek góry lodowej, a większość z tych chorób przebiega bezobjawowo. Tak więc programy badań przesiewowych w kierunku STD są ważne we wszystkich krajach, aby zapobiec przenoszeniu choroby i pomóc naukowcom w planowaniu nowych protokołów leczenia. Ze względu na znaczenie chorób wenerycznych dla zdrowia publicznego, środki zapobiegawcze i edukacja kobiet wydają się konieczne.
Konflikt interesów
Autorzy oświadczają, że nie ma konfliktu interesów w związku z publikacją tej pracy.
Podziękowania
Autorzy doceniają współpracę z irańskimi szpitalami, zwłaszcza z wydziałami patologii oraz położnictwa i ginekologii.
Podziękowania
Autorzy doceniają współpracę z irańskimi szpitalami, zwłaszcza z wydziałami patologii oraz położnictwa i ginekologii.