Zij was de dochter van ene John Duff, en was gehuwd met James Gilbert, smid. De Gilberts waren pioniers die op 30 augustus 1835 aan land gingen aan de oevers van de Yarra River en er hun kamp opsloegen. De schoener Enterprize, eigendom van John Pascoe Fawkner, had hen en andere kolonisten uit Launceston, Tasmanië, gebracht, waar zij op achttienjarige leeftijd met James was getrouwd.

De eerste landingsgroep bestond uit kapitein John Lancey, meester-zeeman, de leider van de landingsgroep en vertegenwoordiger van Fawkner; George Evans, bouwer; timmerlieden William Jackson en Robert Hay Marr; ploeger Charles Wise; smid James Gilbert en zijn zwangere vrouw, Mary; en Evan Evans, de knecht van George Evans.

Op 29 december 1835 beviel Mary van haar zoon, James Melbourne Gilbert, het eerste Europese kind dat in het nieuwe district werd geboren. Ze kreeg 500 acres (200 ha) land en een volkstuintje voor de stad. Een levensgrote buste van Mary Gilbert is te vinden in het Conservatorium, in de Fitzroy Gardens. Het beeld is gemaakt door de Melbourne kunstenares Ailsa O’Connor (1921-1980).

Op 30 april 1837 schonk Mary het leven aan een tweede zoon, Charles Phillip Gilbert, ook verwekt door haar echtgenoot, James. Volgens de transcriptie van haar overlijden waren twee andere zonen John en William.

Hoewel van James (mogelijk later bekend als John) Melbourne Gilbert geen nakomelingen bekend waren, was van zijn jongere broer Charles bekend dat hij minstens acht kinderen verwekte bij zijn vrouw Amelia in zowel Victoria als New South Wales.

Zij werd op 20 februari 1878 per ongeluk verbrand bij een bosbrand in South Talbingo, Tumut River, New South Wales, en op 24 februari van dat jaar begraven op de Cumberland Range.