Hazards

De ninhydrineoplossing zal reageren met de proteïnen van de huid. Draag handschoenen anders krijg je paarse handen.

Chemicaliën en oplossingen

• Ninhydrine oplossing (0.25% in water)
• Methionine
• Hydroxyproline

Materialen

• Twee 100 mL cilinders
• Twee roerstaven staven
• twee magneetroerders
• twee spatels

Procedure

1. Vul de twee cilinders voor de helft met ninhydrine-oplossing.
2. Voeg aan elke cilinder een roerstaaf toe en begin de oplossingen op de magneetroerders te roeren.
3. Voeg aan de ene cilinder methionine toe en aan de andere hydroxyproline. Laat de oplossingen ongeveer 5 tot 10 minuten roeren.
4. Na ongeveer 5 minuten zal in de cilinder met hydroxyproline een goudkleurige oplossing worden gevormd.
5. Na enkele minuten zal in de cilinder met methionine een paars gekleurde oplossing worden gevormd. (Husky Colors).

Discussie

Ninhydrine is het hydraat van indaan-1,2,3-trione. Met uitzondering van proline en hydroxy-proline reageren alle alfa-aminozuren die in eiwitten voorkomen met ninhydrine tot hetzelfde intens gekleurde paarse anion (570 nm). Het paarse anion bestaat uit twee ninhydrinemoleculen, elk zonder hun hydroxygroepen en aan elkaar gebonden door een centrale stikstof. De stikstof is het enige deel van het paarse anion dat afkomstig is van het aminozuur.

Proline en hydroxy-proline reageren niet op dezelfde manier met ninhydrine als de andere aminozuren, omdat hun alfa-aminogroep deel uitmaakt van een vijfledige ring.