Density Gradient Media and Centrifugation for Cell Isolation
Density gradient centrifugation wordt algemeen gebruikt voor de isolatie van specifieke celpopulaties uit volbloed. Deze techniek maakt gebruik van de verschillen in dichtheid tussen de diverse leukocyten en het dichtheidsgradiëntmedium. De geïsoleerde celpopulaties zijn dan ook afhankelijk van de dichtheid van het gebruikte medium.
Voor de isolatie van mononucleaire cellen (MNC’s) uit perifeer bloed, navelstrengbloed en beenmerg wordt aanbevolen media te gebruiken met een dichtheid van 1,077 g/mL, zoals Lymphoprep™ of Ficoll-Paque™. Voor deze specifieke toepassing wordt verdund bloed bovenop het dichtheidsgradiëntmedium gelegd en worden de monsters gecentrifugeerd. Granulocyten en erytrocyten hebben een hogere dichtheid dan mononucleaire cellen en tijdens het centrifugeren bezinken zij door de laag van het dichtheidsmedium. De minder dichte mononucleaire cellen blijven op het grensvlak tussen plasma en dichtheidsmedium. Dit proces wordt aanzienlijk vergemakkelijkt door de dichtheidsgradiëntcentrifugatie uit te voeren in een SepMate™-buis. Voor meer details over hoe deze techniek moet worden uitgevoerd, zie deze video over het isoleren van MNC’s uit volbloed met behulp van centrifugatie met dichtheidsgradiënt.