Sie war die Tochter eines John Duff und war mit James Gilbert, einem Schmied, verheiratet. Die Gilberts waren Pioniersiedler, die am 30. August 1835 an den Ufern des Yarra River an Land gingen und ihr Lager aufschlugen. Der Schoner Enterprize, der John Pascoe Fawkner gehörte, hatte sie und andere Siedler aus Launceston, Tasmanien, gebracht, wo sie James im Alter von achtzehn Jahren geheiratet hatte.

Zur anfänglichen Landungstruppe gehörten Kapitän John Lancey, der Leiter der Landungstruppe und Fawkners Vertreter, George Evans, der Baumeister, die Zimmerleute William Jackson und Robert Hay Marr, der Pflüger Charles Wise, der Schmied James Gilbert und seine schwangere Frau Mary sowie Evan Evans, der Diener von George Evans.

Am 29. Dezember 1835 brachte Mary ihren Sohn James Melbourne Gilbert zur Welt, das erste europäische Kind, das in dem neuen Gebiet geboren wurde. Sie erhielt 500 Acres (200 ha) Land und eine städtische Zuteilung. Eine lebensgroße Büste von Mary Gilbert befindet sich im Conservatory in den Fitzroy Gardens. Die Skulptur wurde von der Melbourner Künstlerin Ailsa O’Connor (1921-1980) geschaffen.

Am 30. April 1837 gebar Mary Gilbert einen zweiten Sohn, Charles Phillip Gilbert, der ebenfalls von ihrem Mann James gezeugt wurde. Der Transkription ihres Todes zufolge waren zwei weitere Söhne John und William.

Obwohl von James (möglicherweise später als John bekannt) Melbourne Gilbert keine Nachkommen bekannt waren, war bekannt, dass sein jüngerer Bruder Charles mindestens acht Kinder mit seiner Frau Amelia sowohl in Victoria als auch in New South Wales gezeugt hatte.

Sie verbrannte versehentlich bei einem Buschfeuer in South Talbingo, Tumut River, New South Wales, am 20. Februar 1878 und wurde am 24. Februar desselben Jahres in der Cumberland Range beigesetzt.