Lipofectamine
Lipofectamine oder Lipofectamine 2000 ist ein gängiges Transfektionsreagenz, das von Invitrogen hergestellt und vertrieben wird und in der Molekular- und Zellbiologie verwendet wird. Es wird verwendet, um die Transfektionseffizienz von RNA (einschließlich mRNA und siRNA) oder Plasmid-DNA in In-vitro-Zellkulturen durch Lipofektion zu erhöhen. Lipofectamine enthält Lipiduntereinheiten, die in wässriger Umgebung Liposome bilden können, die die Transfektionsnutzlast, z. B. DNA-Plasmide, einschließen.
Lipofectamine besteht aus einem 3:1-Gemisch aus DOSPA (2,3-Dioleoyloxy-N- -N,N-dimethyl-1-propaniminiumtrifluoracetat) und DOPE (1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamin), das mit negativ geladenen Nukleinsäuremolekülen einen Komplex bildet, damit diese die elektrostatische Abstoßung der Zellmembran überwinden können. Die kationischen Lipidmoleküle von Lipofectamine werden mit einem neutralen Co-Lipid (Helferlipid) formuliert. Die DNA-haltigen Liposomen (die an ihrer Oberfläche positiv geladen sind) können mit der negativ geladenen Plasmamembran lebender Zellen verschmelzen, da das neutrale Co-Lipid die Fusion des Liposoms mit der Zellmembran vermittelt, so dass die Nukleinsäure-Frachtmoleküle zur Replikation oder Expression in das Zytoplasma gelangen können.
Damit eine Zelle ein Transgen exprimieren kann, muss die Nukleinsäure den Zellkern erreichen, um mit der Transkription zu beginnen. Es kann jedoch vorkommen, dass das transfizierte genetische Material den Zellkern gar nicht erst erreicht, sondern auf dem Weg dorthin irgendwo unterbrochen wird. In sich teilenden Zellen kann das Material den Kern erreichen, indem es in der sich nach der Mitose neu zusammensetzenden Kernhülle gefangen wird. Aber auch in sich nicht teilenden Zellen hat die Forschung gezeigt, dass Lipofectamin die Effizienz der Transfektion verbessert, was darauf hindeutet, dass es dem transfizierten genetischen Material zusätzlich hilft, die intakte Kernhülle zu durchdringen.
Diese Methode der Transfektion wurde von Dr. Yongliang Chu erfunden.