Generation of Knock-out / Knock-in mouse lines
Gene targeting in embryonic stem cells
ES 細胞における遺伝子ターゲットの過程を通して、潜在的にあらゆる遺伝子操作を望むマウス生殖系列に導入することが可能である。 特定の遺伝子配列を構成的または条件付きで欠失させ（ノックアウト）、特定の突然変異または塩基対変化を目的の遺伝子内で正確に行い、レポーター遺伝子または他の発現カセットをゲノム内の定義された位置に導入する（ノックイン）ことが可能である。 この技術により、マウス配列をヒト配列と交換し、ヒト化マウスモデルを作成することができる。
この技術は開発に1年かかることもあり、プロジェクトの初期にかなりの時間をかけて、必要なモデルに最も適した技術と遺伝戦略を選択することが重要である。 トランスジェニックコアはこの種の決定に対してコンサルティングを提供することができ、すべてのターゲティングプロジェクトが実験室での作業を開始する前にコアと詳細に議論されることが不可欠である。
戦略が決定されたとき、ターゲティングベクターが構築され、必要なゲノム操作がゲノムレベルで検出できることを確実にするために、堅牢なスクリーニング戦略が考案されテストされる。 ターゲティングベクターをES細胞にトランスフェクトし、組換えクローンをスクリーニングして、目的の相同組換え事象を検出する。 これらの細胞は着床前胚に注入され、得られたキメラマウスは遺伝子改変マウスの繁殖に使用される。
サービス
利用できるリソースに応じて、モデル開発の特定の段階に分けることができる柔軟なサービスを提供します。
Project Initiation – Free of Charge
- Screening of gene trap databanks for pre-existing ES cell clones
- Screening of Knock-out consortium resources for pre-existing targeting vectors.
- グループとのコンサルティングにより安全で使用できるモデルを実現するために適切な技術に対処することができる。 ES細胞クローンおよびモデル
ターゲティングベクター構築のコンサルティング（無料）
- ゲノム配列解析による遺伝子ターゲティングに使用できる可能性の高いホモロジー領域の特定
- 安全な遺伝子戦略を達成するためのグループとのコンサルティング（無料）。 615>
- ターゲティングベクターの構築は、コアから提供されないが、カセットの提供や方法論のアドバイスで支援できる
- スクリーニング戦略の確立は、コアから提供されないが、カセットの提供や方法論で支援できる。 アドバイス
Gene Targeting in Embryonic Stem cells
- 完成したターゲティングベクターを胚性幹細胞へトランスフェクション
- 少なくとも192の独立した組み換え細胞クローンの分離と保存
- DNA preparation and delivery of 96 well plates for screening
- 解凍, 推定陽性クローンの拡大
- 確認スクリーニングのための推定陽性クローンからの追加DNA調製
- 対象クローンの核型分析
ES細胞クローンの胚盤注入
- 着床前胚注入
- 最大3週間のキメラの生成と収容。
- 繁殖戦略の推奨