ABSTRACT

真核生物の遅れ鎖で合成された岡崎フラグメントは、結紮前に核酸分解処理する必要があります。 核酸分解は、DNAポリメラーゼ・デルタによる鎖置換合成によって生成された5’フラップ構造の中で行われる。 少なくとも3つのDNAヌクレアーゼがある。 Rad27（Fen1）、Dna2、Exo1の少なくとも3つのDNAヌクレアーゼが、岡崎フラグメントフラップの処理に関与していると考えられてきた。 しかし、個々のヌクレアーゼがラグドストランド合成にどのように関与しているのか、また、ヌクレアーゼがない場合に形成されるDNA中間体の構造は、生体内では明確に定義されていない。 我々は、ラギングストランド合成に関与するヌクレアーゼを条件付きで枯渇させ、S. cerevisiaeの生体内で合成された岡崎フラグメントを直接分析することにより、Rad27、Dna2、Exo1がラギングストランド合成に与える影響について系統的に評価することに成功した。 その結果、Rad27がラギングストランドのフラップの大部分を処理し、さらにExo1が大きく寄与しているが、Dna2は寄与していないことがわかった。 ヌクレアーゼの切断が阻害されると、いくつかのモデルで予測されているような長い岡崎フラグメント5’フラップの生成とは対照的に、鎖置換合成の減少が観察された。 さらに、細胞周期を制限した構造体を用いて、核酸分解処理と岡崎フラグメントの結紮の両方をDNA複製から切り離し、ゲノムの大部分が合成された後まで遅らせることができることを実証した

。