C/EBPA mutations in normal-karyotype AML patients

BAALC livelli di espressione in 67 AML cariotipo normale variava da 0.004 a 67.2. Ventitré dei 67 pazienti (34,3%) soddisfacevano i criteri di “bassa” espressione BAALC, mentre 44 pazienti (65,7%) sono stati classificati come “alta” espressione BAALC. Di nuovo, abbiamo determinato se i livelli di mRNA di BAALC nel sangue e nel midollo osseo erano correlati per un dato paziente. Infatti, la Fig. 3B indica una forte correlazione (r = 0.9501) tra i livelli di BAALC nel sangue e nel midollo osseo nei 29 pazienti in cui sia il midollo osseo che il sangue erano disponibili alla diagnosi. Abbiamo anche valutato se la percentuale di blasti in un dato campione correlava con i livelli di espressione BAALC. Tuttavia, nessuna correlazione è stata trovata tra la percentuale di blasti e l’espressione BAALC (correlazione di Pearson, r = 0.0907).

Interessante, i pazienti con alta espressione BAALC non differivano significativamente dai pazienti con bassa espressione BAALC in termini di conta leucocitaria alla diagnosi e il valore mediano di LDH alla diagnosi (Tabella 1). Tuttavia, abbiamo osservato che i sottotipi monoblastici di AML avevano prevalentemente una bassa espressione di BAALC (80%; 12 di 15 AML-M4 e M5) come precedentemente riportato (24). Una bassa espressione di BAALC è stata osservata nella AML mieloblastica (M1 e M2) solo nel 25,6% (11 di 43 pazienti). Al contrario, un’alta espressione di BAALC è stata osservata prevalentemente nei sottotipi mieloblastici di AML (32 di 43; 74,4%) e nell’AML indifferenziata (M0; 5 di 5). Tutti gli AML con sottotipi M6 e M7 (quattro pazienti) avevano anche un’alta espressione di BAALC.

Interessante, sono state rilevate differenze significative nell’immunofenotipo a seconda della diversa espressione di BAALC. Le cellule leucemiche con bassa espressione BAALC avevano un’espressione significativamente più alta degli antigeni CD11b, CD15 e mieloperossidasi. Inoltre, la bassa espressione di BAALC era correlata alla bassa espressione di CD34 (tabella 4).

Il tasso di remissione completa raggiunto dopo la chemioterapia di induzione non era diverso nei pazienti con alta rispetto a bassa espressione BAALC (82% contro 91%; P = 0,3008). Tuttavia, la DFS mediana nei pazienti con alta espressione BAALC era significativamente più breve (8,5 contro 21 mesi; P = 0,0152). Inoltre, la sopravvivenza globale dei pazienti con alta espressione BAALC era diminuita rispetto ai pazienti con bassa espressione BAALC (10 contro 21 mesi; P = 0,0210). In sintesi, alta espressione BAALC in AML cariotipo normale sembra essere associato con DFS ridotta e OS.

In Fig. 4, rappresentazioni dot blot dei livelli di espressione BAALC sono raffigurati per tutti i pazienti insieme (colonna di sinistra; n = 67), per i pazienti con FLT3-ITD solo (seconda colonna; n = 19), per i pazienti con mutazioni CEBPA solo (colonna centrale; n = 12), per i pazienti che hanno né FLT3-ITD né CEBPA mutazioni (quarta colonna; n = 36), e infine per il gruppo di controllo di 12 volontari sani. Abbiamo trovato che i pazienti con FLT3-ITD avevano una vasta gamma di espressione BAALC. Poiché i pazienti con FLT3-ITD ad alta e bassa espressione di BAALC non differivano nel loro decorso (dati non mostrati), concludiamo che la presenza di FLT3-ITD supera l’importanza dell’espressione di BAALC. È interessante notare che i pazienti con mutazioni CEBPA sono stati visti prevalentemente nel gruppo di espressione BAALC “alta”. Solo tre dei 12 pazienti con mutazioni CEBPA hanno avuto una ricaduta. Notevolmente, questi tre pazienti hanno mostrato la più alta espressione BAALC tra il gruppo di 12 pazienti AML a cariotipo normale con mutazioni CEBPA.

Abbiamo anche analizzato all’interno del gruppo di espressione BAALC alta se la DFS o la OS nei pazienti con espressione molto alta (50% superiore) era più breve rispetto ai pazienti con espressione “solo” alta (50% inferiore). Tuttavia, i pazienti con espressione BAALC molto alta non differivano nella loro DFS e OS dai pazienti con alta espressione BAALC (P = 0,497 e P = 0,757, rispettivamente). Allo stesso modo, abbiamo studiato all’interno del gruppo di espressione BAALC bassa se il risultato clinico nei pazienti con espressione molto bassa era più favorevole rispetto ai pazienti con “solo” bassa espressione. Di nuovo, abbiamo osservato che i pazienti con espressione BAALC molto bassa non differivano nella loro DFS e OS dai pazienti con bassa espressione BAALC (P = 0,753 e P = 0,746, rispettivamente). Questi risultati supportano l’utilità del nostro cutoff indicando che questo cutoff sembra effettivamente separare gruppi di pazienti prognosticamente favorevoli e sfavorevoli.

Bassa espressione BAALC nella leucemia mieloide acuta del cariotipo normale senza CEBPA né mutazioni FLT3-ITD è associata a prognosi favorevole. Abbiamo ipotizzato che la determinazione dell’espressione BAALC potrebbe essere particolarmente utile nel sottogruppo di pazienti AML senza mutazioni FLT3-ITD o CEBPA (36 su 67). L’espressione BAALC mediana dei pazienti in questo sottogruppo era circa 10 volte superiore al valore del nostro gruppo di controllo. Diciotto di questi 36 pazienti (50%) avevano bassa espressione BAALC, e 18 avevano alta espressione BAALC.

Più interessante, il corso clinico di questi due sottogruppi differiva drammaticamente sia per DFS (18.4 e 7.4 mesi, rispettivamente; P = 0.0001) e per OS (22.8 e 9.1 mesi, rispettivamente; P = 0.0001) come illustrato in Fig. 5A e B. Concludiamo quindi che l’espressione di BAALC aggiunge informazioni prognostiche significative in particolare in quei pazienti AML con un cariotipo normale dove finora mancano altri marcatori come FLT3-ITD o mutazioni CEBPA.

Infine, abbiamo fatto un’analisi multivariabile per indagare se le mutazioni CEBPA, FLT3-ITD e l’espressione BAALC rappresentano marcatori prognostici indipendenti nella AML a cariotipo normale. I risultati di questa analisi sono riassunti nella tabella 6 e indicano che le mutazioni CEBPA, FLT3-ITD e l’espressione BAALC sembrano essere forti predittori indipendenti di esito nella LAM a cariotipo normale.