Résultats et discussion

La caspase-3 et la caspase-7 présentent une activité différentielle envers les substrats synthétiques.

La caspase-3 et la caspase-7 sont toutes deux activées universellement pendant l’apoptose, indépendamment du stimulus spécifique initiant la mort, et les deux protéases sont largement considérées comme coordonnant la phase de démolition de l’apoptose en clivant un éventail diversifié de substrats protéiques (1, 2). Cependant, la contribution relative de ces protéases à la démolition cellulaire reste largement spéculative. La caspase-3 et la caspase-7 sont les plus étroitement liées l’une à l’autre, par rapport aux autres caspases de mammifères, mais elles présentent néanmoins une divergence de séquence substantielle, avec une identité de séquence globale de 56% et une similarité de séquence de 73% (Fig. 1A). Pour explorer plus en détail les préférences de substrat de ces caspases, nous avons exprimé les deux enzymes sous forme de protéines marquées His dans des bactéries et les avons purifiées jusqu’à homogénéité (Fig. 1B). Les deux caspases ont été titrées en site actif contre DEVD-AFC en combinaison avec l’inhibiteur de polycaspase zVAD-fmk (Fig. 1C). Sur la base des données de titrage du site actif, la concentration active de chaque enzyme a été normalisée pour permettre des comparaisons directes entre ces enzymes dans les expériences suivantes (Fig. 1D). Nous avons ensuite comparé ces caspases en fonction de leur capacité à hydrolyser un panel de substrats tétrapeptidiques synthétiques. Comme l’illustre la figure 1E, les deux caspases ont clivé préférentiellement le DEVD-AFC avec une efficacité essentiellement identique. En revanche, la caspase-3 a clivé LEHD-AFC plus efficacement que la caspase-7, ce qui suggère que ces protéases possèdent des activités distinctes envers certains substrats synthétiques (Fig. 1E).