Envisager la possibilité d’une infection à M pneumoniae chez les patients de tout âge qui présentent des infections des voies respiratoires. L’investigation de laboratoire doit se concentrer à la fois sur la maladie clinique (par exemple, trachéobronchite vs pneumonie) et sur les nombreuses étiologies infectieuses possibles qui peuvent provoquer des manifestations cliniquement similaires. L’étendue des examens de laboratoire doit également refléter la gravité de la maladie et le fait que la maladie justifie une hospitalisation.

Dans près de la moitié des cas de pneumonies communautaires, l’étiologie microbiologique n’est jamais déterminée, malgré des tests de laboratoire appropriés. La maladie légère typique causée par M pneumoniae chez des personnes par ailleurs en bonne santé peut ne pas justifier une enquête microbiologique complète parce qu’un traitement empirique avec des antimicrobiens oraux peut couvrir M pneumoniae et la plupart des autres agents bactériens qui produisent des maladies similaires.

Analyse de laboratoire

Vingt-cinq pour cent des patients développent une leucocytose ; les autres ont une numération leucocytaire dans la plage de référence.

Les patients peuvent avoir un ESR élevé.

La réponse cellulaire des expectorations est mononucléaire, sans bactéries visibles à la coloration de Gram.

Environ 75 % des patients ont un titre d’agglutinine froide d’au moins 1:32 dès la deuxième semaine de la maladie, disparaissant après 6-8 semaines. Il ne s’agit pas d’un test spécifique de l’infection par M pneumoniae, mais plus le titre d’agglutinines froides est élevé (>1:64) chez un patient atteint de pneumonie communautaire, plus il est probable que les agglutinines froides soient dues à M pneumoniae. Aucune anomalie spécifique de la fonction hépatique ou rénale n’est susceptible de se produire.

Pour confirmer l’infection des voies respiratoires par les mycoplasmes, une culture, des tests à base moléculaire et/ou des tests sérologiques sont nécessaires.

Culture

Les spécimens des voies respiratoires adaptés à la culture comprennent les écouvillons de gorge, les expectorations, les aspirations trachéales, le liquide de lavage bronchique, le liquide pleural ou le tissu de biopsie pulmonaire, selon l’état clinique du patient.

Les organismes mycoplasmiques ont des exigences de croissance fastidieuses et sont souvent difficiles et lents à cultiver in vitro. Prenez soin, lors du prélèvement des échantillons, d’inoculer dans un milieu de transport approprié (par exemple, le bouillon SP4 ou le milieu de transport universel), au chevet du patient dans la mesure du possible, et de ne pas permettre la dessiccation. Les cliniciens conseillent de congeler à -70°C si les échantillons ne peuvent pas être transportés au laboratoire de diagnostic immédiatement après leur collecte.

La croissance en culture est lente, nécessitant 3 semaines ou plus dans certains cas, et la culture n’est pas extrêmement sensible pour détecter une infection à M pneumoniae. Le milieu de culture est souvent indisponible, sauf dans les laboratoires de référence spécialisés. Si la culture est tentée, des procédures alternatives incluant la sérologie et/ou des tests d’amplification de l’acide nucléique à base moléculaire doivent également être réalisées.

Tests sérologiques

Les médecins utilisent le plus souvent la sérologie pour confirmer l’infection à M pneumoniae, même si ces tests souffrent de problèmes importants.

De nombreux cliniciens préfèrent les tests immuno-enzymatiques aux anciens tests de fixation du complément, moins sensibles, et aux titres d’agglutinine froide non spécifiques. Ces types de tests sont largement disponibles auprès des laboratoires de référence commerciaux.

Parce que la primo-infection ne garantit pas une immunité protectrice contre les infections futures et que des immunoglobulines G (IgG) résiduelles peuvent subsister suite à des rencontres antérieures avec l’organisme, les experts ont lancé un grand élan pour développer des tests sensibles et spécifiques qui peuvent différencier une infection aiguë d’une infection à distance.

Un diagnostic définitif nécessite une séroconversion documentée par des échantillons appariés obtenus à 2-4 semaines d’intervalle. Bien que certains chercheurs prétendent que les tests d’immunoglobuline M (IgM) ou d’immunoglobuline A (IgA) à titre unique révèlent une infection actuelle, l’IgM peut persister jusqu’à plusieurs mois chez certaines personnes, et de nombreux adultes peuvent ne pas présenter de réponse IgM détectable. Par conséquent, le fait de se fier à un seul test sérologique peut être cliniquement trompeur, et les experts recommandent de fonder le diagnostic d’une infection aiguë sur la séroconversion mesurée simultanément dans les tests pour les IgM et les IgG. L’utilisation de la sérologie pour le diagnostic d’une infection mycoplasmique n’est valable que si le patient a une capacité satisfaisante du système immunitaire humoral à monter une réponse en anticorps.

Tests immuno-enzymatiques à diagnostic rapide

L’une des avancées les plus significatives de ces dernières années pour le diagnostic des infections des voies respiratoires à M pneumoniae est le développement de tests immuno-enzymatiques qualitatifs, rapides, à échantillon unique, sur membrane, facilement adaptables au laboratoire du cabinet du médecin de soins primaires.

Le Remel IgG/IgM Antibody Test System (Thermo-Fisher) mesure simultanément les IgG et les IgM.

La Meridian ImmunoCard (Meridian Bioscience, Inc.) mesure uniquement les IgM.

Les médecins peuvent réaliser les deux tests sans expertise ou équipement particulier, et ils peuvent interpréter les résultats en 10 minutes environ, ce qui élimine la nécessité de collecter des sérums appariés pour une mesure ultérieure des anticorps, bien que des résultats erronés soient parfois obtenus lorsque seuls des échantillons de sérum uniques sont analysés.

Ces deux tests ont une classification de complexité modérée selon le Clinical Laboratory Improvement Amendment (CLIA), ce qui permet à de nombreux médecins de proposer des tests sérologiques pour les anticorps anti-M pneumoniae en tant que test au point de service afin qu’il puisse être utilisé pour orienter la prise en charge des patients.

Ces tests sur échantillon unique ont des limites, comme décrit ci-dessus ; l’utilisation la plus pratique de l’ImmunoCard IgM est peut-être lorsqu’une infection aiguë à M pneumoniae est suspectée chez les enfants et les jeunes adultes.

Analyse moléculaire

Les chercheurs ont développé des systèmes à base moléculaire pour la détection de M pneumoniae en utilisant la réaction en chaîne par polymérase (PCR) ou d’autres technologies. Une variété de cibles génétiques ont été décrites pour les tests PCR visant à détecter M pneumoniae dans les échantillons cliniques. La PCR traditionnelle est progressivement remplacée par des tests de PCR quantitative en temps réel. Des publications récentes indiquent que le gène de la toxine CARDS est plus sensible pour la détection de M pneumoniae que les tests ciblant les gènes de la protéine P1 ou de l’ATPase.

Certains laboratoires de référence proposent des tests PCR qu’ils ont eux-mêmes développés pour la détection de l’infection mycoplasmique actuelle. Deux tests à base moléculaire pour la détection de M pneumoniae sont maintenant approuvés par la FDA pour une utilisation aux États-Unis. L’un d’eux est le test illumigene Mycoplasma (Meridian Bioscience, Inc.). Ce test d’amplification isotherme médiée en boucle (LAMP) permet de détecter M pneumoniae dans un maximum de 10 échantillons cliniques qui peuvent être testés simultanément dans l’heure qui suit la mise en place de l’ADN extrait dans l’incubateur/lecteur. Le test multiplex Biofire Diagnostics FilmArray RP détecte les acides nucléiques dans les écouvillons nasopharyngés pour 20 agents pathogènes des voies respiratoires, dont M pneumoniae, en traitant un échantillon à la fois, avec des résultats en une heure environ .

Le portage des mycoplasmes dans les voies respiratoires supérieures pendant des périodes variables après une infection antérieure peut confondre l’interprétation d’un seul résultat positif au test PCR. De plus, un test PCR peut révéler un très petit nombre d’organismes qui peuvent ne pas avoir de signification étiologique.

Un seuil spécifique de quantité de mycoplasmes dans les voies respiratoires permettant de différencier la colonisation de l’infection n’a pas été établi, de sorte qu’une méthode de détection très sensible telle que la PCR réalisée de manière non quantitative peut surestimer l’importance clinique de M pneumoniae en tant qu’agent pathogène puisqu’il cocircule souvent avec d’autres agents pathogènes respiratoires bactériens et viraux. Pour ces raisons, les tests moléculaires peuvent être accompagnés de tests sérologiques pour une précision diagnostique maximale, à moins de tester un liquide corporel normalement stérile dans lequel la présence de n’importe quel nombre de mycoplasmes serait considérée comme une preuve de la maladie. Les nouveaux tests quantitatifs de PCR en temps réel atténuent ce problème dans une certaine mesure.

Compte tenu des limites importantes de la sérologie, du délai d’exécution prolongé et de l’insensibilité de la culture, et de la disponibilité croissante d’un diagnostic rapide de l’infection mycoplasmique chez les patients symptomatiques par des tests à base moléculaire, les tests à base moléculaire sont maintenant la méthode préférée pour le diagnostic de l’infection à M pneumoniae lorsqu’ils sont disponibles pour les médecins de soins primaires par le biais d’un hôpital ou d’un laboratoire de référence.