Infection cervicale par le virus de l’herpès simplex, Chlamydia trachomatis et Neisseria gonorrhoeae chez les femmes symptomatiques, Dubaï, EAU : A Molecular Approach
Abstract
Tragiquement, les infections des voies génitales sont encore un problème majeur de santé publique dans de nombreuses régions. Cette étude a été entreprise pour déterminer la prévalence de l’infection du col de l’utérus par le virus Herpes simplex (HSV), Chlamydia trachomatis (CT), et Neisseria gonorrhoeae (NG) chez les femmes mariées se référant à l’hôpital iranien, Dubaï, EAU. Dans le cadre d’une enquête transversale rétrospective, 201 patientes âgées de 16 à 80 ans et adressées au service d’obstétrique et de gynécologie de l’hôpital iranien de Dubaï (EAU) en 2010 ont été recrutées. Les patientes ont été classées en trois groupes d’âge : 15-30 ans (groupe I), 31-40 ans (groupe II) et 41 ans (groupe III). Un échantillon d’écouvillon cervical a été prélevé sur chaque femme et la prévalence de l’infection cervicale par HSV, CT et NG a été déterminée par la méthode PCR. Le HSV, le CT et le NG ont été détectés dans 6,5 %, 10,4 % et 5,5 % des échantillons prélevés par écouvillon, respectivement. En ce qui concerne l’âge, une différence significative a été remarquée pour la prévalence du NG et du HSV entre les groupes I et III. En raison de l’importance pour la santé publique des maladies sexuellement transmissibles (MST), de leur impact durable sur la qualité de vie et de leur poids économique, des mesures de prévention et d’éducation des femmes semblent nécessaires.
1. Introduction
Tragiquement, les infections des voies génitales constituent encore un problème majeur de santé publique dans de nombreuses régions . Chaque année, aux États-Unis, plus de 15 millions de nouveaux cas de maladies sexuellement transmissibles (MST) ont été signalés . Chez les femmes, certaines d’entre elles peuvent entraîner à long terme des maladies inflammatoires pelviennes, l’infertilité, des grossesses extra-utérines, la dyspareunie et le cancer du col de l’utérus . Chaque année, plus de la moitié des nouveaux cas de MST surviennent chez les jeunes de 15 à 24 ans. En outre, chez les jeunes femmes et les adolescentes, elles peuvent entraîner une dépression, un faible soutien social et un stress important.
La majorité des MST telles que le virus de l’herpès simplex (HSV), Chlamydia trachomatis (CT) et Neisseria gonorrhoeae (NG) se sont révélées asymptomatiques chez les femmes . L’herpès génital est généralement considéré comme une MST chronique courante dans les pays développés et en développement, avec une morbidité substantielle. L’infection est causée par deux types de virus, dont le HSV-2 (principalement) et le HSV-1 (parfois), dont la prévalence et l’incidence ont augmenté au cours des trois dernières décennies.
L’infection à CT est la cause la plus fréquente de MST bactérienne dans le monde, en particulier chez les jeunes femmes. L’infection est asymptomatique dans la plupart des cas et peut être transmise lors de contacts sexuels vaginaux, oraux ou anaux et peut être transmise par la mère au nouveau-né également .
La gonorrhée est causée par NG et il a été démontré que ce pathogène avait le potentiel de développer une résistance aux agents antimicrobiens fréquemment utilisés, en particulier chez les patients non soignés. Ces cas peuvent continuer à se transmettre et faciliter l’émergence rapide de la résistance aux antimicrobiens . Le taux d’incidence de la maladie est élevé ; par conséquent, le diagnostic des infections tant symptomatiques qu’asymptomatiques est d’une grande importance .
Ces dernières années, les kits de détection rapide et les dipsticks ont été utilisés comme des méthodes courantes, pratiques et rapides de dépistage des MST. Cependant, de nouvelles méthodes moléculaires telles que la PCR, la PCR qualitative et quantitative en temps réel, et l’hybridation de l’ADN ont été introduites comme des techniques plus fiables dans le diagnostic d’une grande variété de MST par rapport aux méthodes sérologiques. En outre, la surveillance du niveau d’ADN d’un agent pathogène dans les fluides corporels peut révéler l’état de la maladie, sa réponse aux médicaments et ses modèles de résistance .
À Dubaï, aux Émirats arabes unis, le mode de vie des individus a changé. En outre, de nombreux travailleurs migrants ou investisseurs ont été attirés par cette ville depuis plus de 100 pays d’Asie, d’Afrique, d’Europe, etc. Comme Dubaï est la 8e ville la plus visitée au monde par les touristes et qu’elle a attiré plus de 15 millions de touristes de différents pays jusqu’en 2015, les MST peuvent être un problème de santé publique émergent à Dubaï, EAU. Le dépistage des MST dans la population de Dubaï peut être la première et très importante étape de la gestion d’un problème de santé publique. L’objectif de cette étude était de déterminer la prévalence de l’infection cervicale par le HSV, le CT et le NG chez les femmes mariées se référant à l’hôpital iranien, Dubaï, EAU.
2. Sujets et méthodes
2.1. Population de l’étude
L’étude a porté sur 201 patientes âgées de 16 à 80 ans ( ans) qui se sont adressées au département d’obstétrique et de gynécologie de l’hôpital iranien de Dubaï en 2010 avec des symptômes tels que des démangeaisons dans la région génitale, une dyspareunie, une dysurie ou des écoulements vaginaux anormaux. Les patients étaient de nationalités différentes (tableau 1) et tous étaient mariés. Les patientes ont été classées en trois groupes d’âge : 15-30 ans (groupe I), 31-40 ans (groupe II) et ≥41 ans (groupe III). Un échantillon d’écouvillon cervical a été prélevé par des écouvillons stériles chez toutes les patientes et a été transféré dans un milieu de transport viral au Centre de recherche en microbiologie clinique du Professeur Alborzi, Hôpital Nemazee, Shiraz, Iran, pour des investigations plus approfondies. L’étude a été approuvée au bureau de l’éducation et de la recherche de l’hôpital iranien, à Dubaï.
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2.2. Extraction de l’ADN
L’ADN a été extrait des échantillons d’écouvillons dans 200 μL de milieu de transport viral par le mini kit Invisorb spin virus DNA (Invitek, Berlin, Allemagne) selon le protocole du fabricant. Pour la détection de la CT, une quantité standardisée d’ADN de contrôle interne, fournie avec le kit de PCR en temps réel, a été ajoutée au kit de tampon de lyse pour contrôler l’efficacité des extractions. Des contrôles négatifs et positifs ont été inclus dans le processus d’extraction.
2.3. PCR quantitative en temps réel pour la détection du HSV et du CT
La PCR quantitative en temps réel a été réalisée en utilisant des paires d’amorces oligonucléotidiques et des sondes spécifiques de la région de la glycoprotéine B (gB) du HSV1 et du HSV2, comme indiqué précédemment . Les amorces utilisées étaient HSVFP (5′TCC CGG TAC GAA GAC CAG3′) et HSVRP (5′AGC AGG CCG CTG TCC TTG3′), et la sonde était HSVTCP (5′FAMTGG TCC TCC AGC ATG GTG ATG TTG/C AGG TCGTAMRA3′). La réaction a été réalisée selon le protocole suivant : 2 min d’incubation à 50°C pour l’activation de l’AmpErase, 10 min à 95°C pour l’activation de la polymérase et pendant 45 cycles, 15 secondes à 94°C pour la dénaturation, et 60 secondes à 58°C pour l’annexion, l’extension et la collecte des données. Chaque 50 μL de mélange PCR contenait 10 μL d’ADN purifié, une concentration de 840 nM de chaque amorce et 100 nM de sonde dans un mélange maître PCR universel TaqMan 1x (Applied Biosystems, Branchburg, New Jersey, États-Unis).
Pour la détection du CT, une PCR quantitative en temps réel a été réalisée avec des paires d’amorces oligonucléotidiques et une sonde spécifique du génome du CT par le kit avancé (PrimerDesign Ltd, Millbrook Technology Campus, South Hampton, Royaume-Uni). L’amplification a été réalisée à l’aide des réactifs du mélange maître TaqMan universal real time PCR (Roche, Branchburg, New Jersey, États-Unis). Elle a été réalisée avec le protocole en quatre étapes suivant : 2 min d’incubation à 50°C pour l’activation de l’AmpErase, 10 min à 95°C pour l’activation de la polymérase et pendant 45 cycles, 10 secondes à 95°C pour la dénaturation, et 60 secondes à 60°C pour l’hybridation, l’extension et la collecte des données.
Toutes les amplifications ont été réalisées dans une machine Applied Biosystem Sequence Detector 7500 (Applied Biosystems, USA). Des contrôles négatifs ont été inclus dans le processus d’extraction entre tous les 20 échantillons cliniques. Tous les échantillons négatifs ont été testés deux fois.
2.4. Détection du NG
Le NG a été détecté avec un kit de détection PCR (CinnaGen Inc., Iran) selon le protocole du fabricant. Le mélange réactionnel a été chauffé à 94°C pendant 3 min, puis incubé pendant 35 cycles de 94°C pendant 45 secondes, 50°C pendant 20 secondes et 72°C pendant 30 secondes et pendant 5 min à 72°C pour une extension supplémentaire. Les produits de PCR ont été analysés sur gel d’agarose à 1%.
2,5. Analyse statistique
Les différences de prévalence du HSV, du CT et du NG entre les groupes d’âge ont été analysées avec le test du chi carré. De plus, l’association entre le HSV, le CT et le NG et la survenue d’une infection cervicale fongico-bactérienne a été analysée par le test du chi carré. Toutes les données ont été analysées par le logiciel SPSS (SPSS pour Windows, version 16, SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Toutes les valeurs de ont été considérées comme statistiquement significatives.
3. Résultats
L’infection cervicale à Candida spp. et à Coccobacilli a été considérée comme une infection fongique-bactérienne avec une prévalence de 45,3% et une infection non fongique-bactérienne avec une prévalence de 54,7%. Le HSV et le CT étaient positifs dans 13 (6,5 %) et 21 (10,4 %) échantillons d’écouvillons, respectivement. Le nombre de copies de l’ADN du HSV mesuré par le test PCR en temps réel variait de 3,11 × 103 à 7,18 × 105 copies/mL dans le milieu de transport viral (médiane de 4 × 104 copies/mL) et le nombre de copies de l’ADN du CT variait de 3,48 × 103 à 7,11 × 106 copies/mL dans le milieu de transport viral (médiane de 3,33 × 105 copies/mL). Le NG a été détecté chez 11 (5,5%) patients.
Le tableau 2 présente la prévalence des maladies dans les différents groupes d’âge. Aucun des patients ne présentait d’infections mixtes. Il n’y avait pas de différence significative dans la prévalence du CT entre les différents groupes d’âge (). La prévalence du NG et du HSV n’était pas significativement différente entre les groupes I et II et II et III () ; cependant, il y avait des différences significatives entre les groupes I et III (). De plus, les différences de prévalence des infections HSV, CT et NG n’étaient pas statistiquement significatives entre le groupe des infections cervicales fongiques-bactériennes et le groupe des infections non fongiques-bactériennes (). Le tableau 3 compare nos données à Dubaï, EAU, pour la prévalence de HSV, CT, et NG avec différentes études.
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Dans l’étude actuelle, sur 201 femmes, 6,5%, 10,4% et 5,5% étaient infectées par le HSV, le CT et le NG, respectivement. Nos résultats actuels sur l’infection par le HSV, le CT et le NG sont cohérents avec les enquêtes précédentes sur la prévalence des MST. Plus récemment, une enquête similaire a trouvé de l’ADN HSV-2 chez 7 % de 509 femmes aux États-Unis. Une étude antérieure menée en Turquie a montré que 12,7 % des femmes à faible risque étaient infectées par le CT . Gaydos et al. ont rapporté que 3,8 % des femmes de leur population étudiée étaient infectées par le NG.
Les publications antérieures ont indiqué que la majorité des infections par HSV, CT et NG peuvent être asymptomatiques et de longue durée. De même, dans la présente étude, aucune des femmes n’était consciente de son infection avant de se soumettre au dépistage ; cependant, certains symptômes cliniques étaient visibles. La prévalence des MST était systématiquement plus élevée dans les populations à haut risque que dans celles considérées comme à faible risque. Les facteurs de risque associés aux MST les plus fréquemment cités sont le célibat et les partenaires sexuels multiples. À Amsterdam, aux Pays-Bas, la prévalence la plus élevée du HSV-1 ou du HSV-2 a été observée dans les groupes d’âge les plus jeunes, tandis que les adolescents et les adultes dans la vingtaine avaient une prévalence de 5,26 % et 4,31 %, respectivement. Au Pérou, la prévalence de l’infection chez les femmes atteintes d’une infection CT était de 6 à 5 %, et celle de l’infection NG de 0 à 1 % . En Corée du Sud, le taux de détection global du CT était de 2,4 % et celui du HSV de type II de 0,8 % . Chez les travailleuses du sexe tunisiennes, le CT, le NG et la PCR du HSV-2 étaient positifs chez 72,9 %, 11,2 % et 1,1 % des femmes, respectivement .
Bien que des études antérieures aient montré que le jeune âge est associé à des résultats positifs pour le CT, certaines enquêtes n’ont signalé aucune corrélation entre l’âge et la prévalence de la maladie . De même, nos résultats ont montré qu’il n’y avait pas de différence significative dans la prévalence du CT entre les différents groupes d’âge.
Diverses études ont montré que la prévalence du HSV augmentait systématiquement avec l’âge dans la plupart des zones géographiques . Comme prévu, les résultats de la présente étude ont indiqué que la prévalence du HSV était significativement plus élevée dans le groupe III par rapport au groupe I. Une étude similaire au Bangladesh a révélé que la prévalence des anticorps HSV-2 était faible chez les femmes mariées de moins de 20 ans. Par conséquent, cette prévalence augmentait avec l’âge, ce qui pourrait être lié à la durée des années d’activité sexuelle chez les femmes.
En revanche, nos résultats ont démontré que la prévalence du NG diminuait avec l’âge et qu’il y avait une différence significative dans la prévalence de l’infection entre les groupes I et III et que l’infection était plus répandue chez les jeunes femmes. Ce résultat est en contradiction avec une autre étude. Au Nigéria, l’infection par le NG était plus fréquente chez les femmes âgées de 25 ans.
Une étude menée en Chine parmi les travailleuses du sexe a démontré que 8% des populations étudiées étaient infectées par le NG, ce qui était proche du taux d’infection chez les jeunes femmes. Bien que toutes les femmes de la présente étude étaient mariées et n’avaient pas de relations sexuelles en dehors de la famille, la prévalence des MST chez ces patientes était élevée. Cependant, la relation sexuelle du partenaire doit être évaluée. Une étude antérieure en France a indiqué que parmi 111 partenaires masculins asymptomatiques de couples infertiles, le CT a été détecté par la PCR COBAS AMPLICOR et les tests sérologiques chez 6,3% et 4,5% des patients, respectivement . Par conséquent, il semble que la surveillance des partenaires sexuels soit essentielle pour la prévention des MST.
Une infection fongique-bactérienne du col de l’utérus a été trouvée chez 45,3% de la population étudiée, mais il n’y avait pas de différences significatives dans la prévalence des infections HSV, CT et NG entre le groupe d’infection fongique-bactérienne du col de l’utérus et le groupe non fongique-bactérien. Il a été démontré que des infections mixtes avec une vaginose bactérienne ou fongique et des MST peuvent se produire, telles que HSV, CT, NG et T. vaginalis. Des recherches supplémentaires sont nécessaires pour évaluer de manière exhaustive le rôle des infections bactériennes et fongiques du col de l’utérus dans la pathogenèse du HSV, du CT, du NG et d’autres MST. La surveillance de la prévalence et de l’incidence des MST dans la population, et en particulier chez les jeunes, aiderait les autorités gouvernementales à mettre en œuvre et à évaluer les stratégies et les efforts de prévention. En raison de l’impact considérable et durable des MST sur la qualité de vie et des pertes économiques dues aux coûts médicaux élevés, il est nécessaire de procéder à une évaluation précise des MST dans le monde entier. Jerman et al. ont rapporté que 1,1 million de nouveaux cas de MST sont apparus chez les jeunes patients en Californie en 2005, avec un coût médical direct de 1,1 milliard de dollars US. De plus, les MST symptomatiques ne sont que la partie émergée de l’iceberg et la plupart de ces maladies sont asymptomatiques. Les programmes de dépistage des MST sont donc importants dans tous les pays pour prévenir la transmission de la maladie et aider les scientifiques à planifier de nouveaux protocoles de traitement. En raison de l’importance des MST pour la santé publique, des mesures de prévention et l’éducation des femmes semblent nécessaires.
Conflit d’intérêts
Les auteurs déclarent qu’il n’y a pas de conflit d’intérêts concernant la publication de cet article.
Reconnaissance
Les auteurs apprécient la coopération de l’hôpital iranien, en particulier les départements de pathologie et d’obstétrique et gynécologie.