Stability of a metabolizable ester bond in radioimmunoconjugates
Esterisidoksia on käytetty metaboloituvina sidoksina vähentämään radioaktiivisuuspitoisuuksia muissa kuin kohdekudoksissa metallisilla radionuklideilla leimattujen vasta-aineiden antamisen jälkeen. Tässä radiokemiallisessa vasta-ainesuunnittelussa esterisidosten olisi pilkkoututtava nopeasti muissa kuin kohdekudoksissa, mutta samalla vaaditaan esterisidosten suurta stabiilisuutta plasmassa, jotta kohteen radioaktiivisuustasot säilyisivät. Esterisidoksen vakauttamista koskevien rakenteellisten vaatimusten arvioimiseksi kehitettiin uusi bentsyyli-EDTA:sta johdettu bifunktionaalinen kelatoiva aine, jossa on esterisidos, (1-bentsyyli]etyleenidiamiini-N,N,N,N’,N’,N’ -tetraetikkahappo; MESS-Bz-EDTA). MESS-Bz-EDTA yhdistettiin tioloituun monoklonaaliseen vasta-aineeseen (OST7, IgG1), joka valmistettiin pelkistämällä sen disulfidisidoksia, jotta esterisidos saatiin lähelle ja lähelle vasta-ainemolekyyliä. Vertailun vuoksi 1-etyleenidiamiini-N,N,N,N’,N’-tetraetikkahappo (EMCS-Bz-EDTA) ja meleimidoetyyli-3-jodohippuraatti (MIH) kytkettiin OST7:ään samalla kytkentäkemialla. Kun OST7-MESS-Bz-EDTA-111In inkuboitiin 50-prosenttisessa hiiren plasmassa tai neutraalin pH:n puskuroidussa liuoksessa, radioaktiivisuus vapautui nopeasti, ja yli 95 prosenttia alkuperäisestä radioaktiivisuudesta vapautui 24 tunnin inkuboinnin jälkeen molemmissa liuoksissa esterisidoksen pilkkoutumisen seurauksena. Toisaalta vain noin 20 % radioaktiivisuudesta vapautui OST7-MIH-131I:stä molemmissa liuoksissa saman inkubaatioajan kuluessa. Hiirten biodistribuutiotutkimuksissa OST7-MIH-131I:llä havaittiin hieman nopeampi radioaktiivisuuden poistuminen verestä ja pienempi radioaktiivisuuspitoisuus maksassa ja munuaisissa kuin OST7-EMCS-Bz-EDTA-111In:llä, kun taas OST7-MESS-Bz-EDTA-111In:llä havaittiin, että radioaktiivisuus poistui verestä paljon nopeammin ja lähes verrattavissa olevin määrin OST7-MIH-131I:n ja succinamidobenzyl-EDTA-111In:n poistumiseen verestä. Nämä havainnot sekä aiemmat havainnot radiomerkityistä vasta-aineista, joissa on esterisidoksia, viittasivat siihen, että vaikka esterisidoksen tuominen lähelle vasta-ainemolekyyliä vakauttaa esterisidoksen esteraasien pääsyä vastaan, esterisidoksiin kiinnittyneiden sidosten kemiallisilla rakenteilla ja radiomerkinnöillä on merkittävä rooli esterisidoksen kemiallisessa vakaudessa. Tämä saattaa selittää tähän mennessä raportoitujen radioimmunokonjugaattien esterisidosten erilaisen vakauden.