Harkitse M pneumoniae-infektion mahdollisuutta kaikenikäisillä potilailla, joilla on hengitystieinfektioita. Laboratoriotutkimuksissa on keskityttävä sekä kliiniseen sairauteen (esim. trakeobronkiitti vs. keuhkokuume) että moniin mahdollisiin infektioperäisiin etiologioihin, jotka voivat aiheuttaa kliinisesti samanlaisia oireita. Laboratoriotutkimusten laajuuden tulisi myös heijastaa sairauden vakavuutta ja sitä, onko sairaus aiheellinen sairaalahoitoon.

Jopa puolessa kaikista yhteisperäisten keuhkokuumeiden tapauksista mikrobiologista etiologiaa ei koskaan määritetä asianmukaisista laboratoriokokeista huolimatta. M pneumoniaen aiheuttama tyypillinen lievä sairaus muuten terveillä henkilöillä ei välttämättä anna aihetta kattavaan mikrobiologiseen tutkimukseen, koska empiirinen hoito suun kautta otettavilla mikrobilääkkeillä voi peittää M pneumoniaen ja useimmat muut samankaltaista sairautta aiheuttavat bakteeriperäiset aineet.

Laboratorioanalyysi

25 prosentille potilaista kehittyy leukosytoosia; lopuilla leukosyyttiarvot ovat viitealueen sisällä.

Potilailla voi olla kohonnut ESR.

Ysköksen soluvaste on mononukleaarinen, eikä Gram-värjäyksessä näy bakteereja.

Potilaista noin 75 %:lla on kylmän agglutiniinin titteri vähintään 1:32 toiseen sairastumisviikkoon mennessä, ja se häviää 6-8 viikkoon mennessä. Tämä ei ole spesifinen testi M pneumoniae-infektiolle, mutta mitä suurempi kylmäagglutiniinititteri on (>1:64) potilaalla, jolla on yhteisperäinen keuhkokuume, sitä todennäköisemmin kylmäagglutiniinit johtuvat M pneumoniaesta. Maksan tai munuaisten toiminnassa ei todennäköisesti esiinny erityisiä poikkeavuuksia.

Mykoplasman aiheuttaman hengitystieinfektion varmistamiseksi tarvitaan viljelyä, molekyylipohjaisia testejä ja/tai serologisia testejä.

Viljely

Viljelyyn soveltuvia hengitystietutkimusnäytteitä ovat nielun pyyhkäisynäytteet, yskökset, henkitorven aspiraatit, keuhkoputkien huuhteluneste, keuhkopussineste tai keuhkobiopsiakudos potilaan kliinisestä tilasta riippuen.

Mykoplasmaloisilla organismeilla on vaativia kasvuvaatimuksia, ja niiden kasvattaminen in vitro -menetelmällä (in vitro -kasvatus) on usein vaikeaa ja hidasta. Huolehdi näytettä kerätessäsi siitä, että inokulaatio tehdään sopivaan kuljetusalustaan (esim. SP4-liemi tai universaali kuljetusalusta), mahdollisuuksien mukaan vuodeosastolla, ja että se ei pääse kuivumaan. Kliinikot suosittelevat pakastamista -70 °C:ssa, jos näytteitä ei voida kuljettaa diagnostiseen laboratorioon välittömästi näytteenoton jälkeen.

Kasvu viljelyssä on hidasta, ja se vaatii joissakin tapauksissa 3 viikkoa tai pidempään, eikä viljely ole erittäin herkkä M pneumoniae -infektion toteamiseksi. Viljelyalustaa ei useinkaan ole saatavilla muualta kuin erikoistuneista vertailulaboratorioista. Jos viljelyä yritetään tehdä, olisi suoritettava myös vaihtoehtoisia menetelmiä, kuten serologisia ja/tai molekyylipohjaisia nukleiinihappojen monistustestejä.

Serologiset testit

Lääkärit käyttävät serologiaa useimmiten M pneumoniae -infektion varmistamiseen, vaikka näissä testeissä on huomattavia ongelmia.

Monet kliinikot suosivat entsyymisidonnaisia immunosorbenttimäärityksiä vanhempien, vähemmän herkkien komplementtisitoutumismääritysten ja epäspesifisten kylmäagglutiniinititterien sijaan. Tämäntyyppisiä testejä on laajalti saatavilla kaupallisten vertailulaboratorioiden kautta.

Koska primaari-infektio ei takaa suojaavaa immuniteettia tulevia infektioita vastaan ja jäännösimmunoglobuliini G:tä (IgG) voi jäädä jäljelle aikaisemmista tapaamisista organismin kanssa, asiantuntijat ovat käynnistäneet suuren vauhdin kehittääkseen herkkiä ja spesifisiä testejä, joilla voidaan erottaa akuutti infektio kaukaisesta infektiosta toisistaan.

Määritelmällinen diagnoosi edellyttää serokonversiota, joka on todettu paritetuilla näytteillä, jotka on saatu 2-4 viikon välein. Vaikka jotkut tutkijat väittävät, että yhden titterin immunoglobuliini M (IgM) tai immunoglobuliini A (IgA) -määritykset paljastavat nykyisen infektion, IgM voi säilyä jopa useita kuukausia joillakin ihmisillä, ja monilla aikuisilla ei välttämättä ole havaittavaa IgM-vastetta. Tämän vuoksi yhteen ainoaan serologiseen testiin luottaminen voi olla kliinisesti harhaanjohtavaa, ja asiantuntijat suosittelevat, että akuutin infektion diagnoosi perustuu serokonversioon, joka mitataan samanaikaisesti sekä IgM- että IgG-määrityksillä. Serologian käyttö mykoplasmatulehduksen diagnosoimiseksi on pätevää vain, jos potilaan humoraalisen immuunijärjestelmän kyky muodostaa vasta-ainevaste on tyydyttävä.

Nopeat diagnostiset entsyymi-immunosorbenttimääritykset

Yksi viime vuosien merkittävimmistä edistysaskeleista M pneumoniae -hengitystieinfektioiden diagnosoinnissa on laadullisten, nopeiden, yhden näytteen mittaukseen perustuvien kalvopohjaisten entsyymi-immunosorbenttimääritysten kehittäminen, jotka voidaan helposti sovittaa perusterveydenhuollon lääkärin vastaanoton laboratorioon.

Remel IgG/IgM Antibody Test System (Thermo-Fisher) mittaa samanaikaisesti sekä IgG:tä että IgM:ää.

Meridian ImmunoCard (Meridian Bioscience, Inc.) mittaa vain IgM:ää.

Lääkärit voivat suorittaa molemmat testit ilman erityistä asiantuntemusta tai laitteita, ja he voivat tulkita tulokset noin 10 minuutissa, jolloin pariseerumeita ei tarvitse kerätä myöhempää vasta-ainemittausta varten, vaikka joskus saadaan virheellisiä tuloksia, kun analysoidaan vain yksittäisiä seeruminäytteitä.

Kummallakin testillä on CLIA (Clinical Laboratory Improvement Amendment) -standardin (CLIA: Clinical Laboratory Improvement Amendment) mukainen keskivaikea monimutkaisuusluokitus, minkä ansiosta monet lääkärit voivat tarjota M pneumoniae -vasta-aineiden serologisia testejä hoitopaikkatesteinä, jotta niitä voidaan käyttää potilaan hoidon ohjaamiseen.

Tällaisilla yhden näytteen määrityksillä on edellä kuvatut rajoitukset; IgM ImmunoCardin ehkä käytännöllisin käyttötarkoitus on silloin, kun lapsilla ja nuorilla aikuisilla epäillään akuuttia M pneumoniae-infektiota.

Molekyylianalyysi

Tutkijat ovat kehittäneet molekyylipohjaisia järjestelmiä M pneumoniae:n osoittamiseksi polymeraasiketjureaktiota (PCR) tai muita tekniikoita käyttäen. Erilaisia geenikohteita on kuvattu PCR-määrityksiä varten, joilla M pneumoniae voidaan havaita kliinisistä näytteistä. Perinteinen PCR on vähitellen korvautumassa kvantitatiivisilla reaaliaikaisilla PCR-määrityksillä. Viimeaikaiset julkaisut osoittavat, että CARDS-toksiinigeeni on herkempi M pneumoniae -bakteerin havaitsemisessa kuin määritykset, jotka kohdistuvat P1-proteiini- tai ATPaasigeeneihin.

Jotkut vertailulaboratoriot tarjoavat itse kehittämiään PCR-määrityksiä nykyisen mykoplasmainfektion osoittamiseen. Kaksi molekyylipohjaista testiä M pneumoniaen osoittamiseksi on nyt hyväksytty FDA:n käyttöön Yhdysvalloissa. Toinen näistä on illumigene Mycoplasma assay (Meridian Bioscience, Inc.). Tämä loop-mediated isothermal amplification (LAMP) -testi mahdollistaa M pneumoniae -bakteerin havaitsemisen jopa kymmenestä kliinisestä näytteestä, jotka voidaan testata samanaikaisesti yhden tunnin kuluessa siitä, kun uutettu DNA on asetettu inkubaattoriin/lukulaitteeseen. Multiplex Biofire Diagnostics FilmArray RP -menetelmällä havaitaan nenänielun pyyhkäisynäytteistä nukleiinihappoja 20 hengitystiepatogeenin, mukaan lukien M pneumoniae, osalta, kun yksi näyte käsitellään kerrallaan, ja tulokset saadaan noin tunnissa .

Mykoplasmojen kulkeutuminen ylempiin hengitysteihin vaihtelevia aikoja aikaisemman infektion jälkeen voi sekoittaa yksittäisen positiivisen PCR-testin tuloksen tulkintaa. Lisäksi PCR-määritys voi paljastaa hyvin pieniä määriä organismeja, joilla ei välttämättä ole etiologista merkitystä.

Hengitysteissä olevien mykoplasmojen määrälle ei ole vahvistettu tiettyä kynnysarvoa, jonka perusteella kolonisaatio voitaisiin erottaa infektiosta, joten erittäin herkkä osoitusmenetelmä, kuten PCR, joka suoritetaan ei-kvantitatiivisella tavalla, saattaa yliarvioida M pneumoniae:n kliinisen merkityksen taudinaiheuttajana, koska se kiertää usein yhdessä muiden bakteeri- ja virusperäisten hengitystiepatogeenien kanssa. Näistä syistä molekyylipohjaisiin määrityksiin voidaan liittää serologisia määrityksiä mahdollisimman suuren diagnostisen tarkkuuden saavuttamiseksi, ellei testata normaalisti steriiliä kehon nestettä, jossa minkä tahansa mykoplasman esiintymistä pidettäisiin todisteena taudista. Uudemmat kvantitatiiviset reaaliaikaiset PCR-määritykset lieventävät tätä ongelmaa jossain määrin.

Kun otetaan huomioon serologian merkittävät rajoitukset, pitkät läpimenoajat ja viljelmien epäherkkyys sekä se, että mykoplasmainfektioiden nopea diagnosointi oireilevilla potilailla on yhä useammin mahdollista molekyylipohjaisten määritysten avulla, molekyylipohjaiset testit ovat nykyään suositeltavin tapa diagnosoida M pneumoniae -infektio, kun ne ovat perusterveydenhuoltoa hoitaville lääkäreiden saatavilla sairaalassa sijaitsevien laboratorioiden tai referenssilaboratorion kautta.