Geenin kohdentaminen alkion kantasoluihin

Embrion kantasoluihin kohdistetun geenin kohdentamisprosessin avulla hiirten sukulinjaan voidaan tuoda potentiaalisesti mitä tahansa geneettisesti toivottua geneettistä manipulaatiota. Tiettyjä geenisekvenssejä voidaan poistaa joko konstitutiivisesti tai ehdollisesti (Knock-out), spesifisiä mutaatioita tai emäsparimuutoksia voidaan tehdä täsmällisesti kiinnostavan geenin sisällä ja reportterigeenejä tai muita ekspressiokasetteja voidaan tuoda määriteltyihin kohtiin genomissa (Knock-in). Hiirisekvenssit voidaan vaihtaa ihmissekvensseihin tämän tekniikan avulla humanisoitujen hiirimallien luomiseksi.

Tämän tekniikan kehittämiseen voi kulua jopa vuosi, joten on tärkeää käyttää paljon aikaa hankkeen alussa sen varmistamiseksi, että haluttuun malliin valitaan sopivin tekniikka ja geneettinen strategia. Siirtogeeninen ydin voi tarjota neuvontaa tämäntyyppisissä päätöksissä, ja on olennaista, että kaikista kohdentamishankkeista keskustellaan yksityiskohtaisesti ytimen kanssa ennen työn aloittamista laboratoriossa.

Kun strategiasta on päätetty, rakennetaan kohdentamisvektori ja laaditaan ja testataan vankka seulontastrategia sen varmistamiseksi, että tarvittava genomimanipulaatio voidaan havaita genomitasolla. Kohdistusvektori transfektoidaan sitten ES-soluihin ja rekombinantti-kloonit seulotaan halutun homologisen rekombinaatiotapahtuman varalta. Nämä solut injektoidaan sitten esi-implantaatioalkioihin, ja tuloksena syntyviä kimeerisiä hiiriä käytetään geneettisesti muunnetun hiirilinjan jalostamiseen.

Palvelu

Tarjoamme joustavaa palvelua, joka voidaan jakaa mallin kehittämisen tiettyihin vaiheisiin käytettävissä olevien resurssien mukaan.

Projektin käynnistäminen – maksuton

• Konsultointi ryhmän kanssa sopivan tekniikan valitsemiseksi turvallisen ja käyttökelpoisen mallin aikaansaamiseksi
• Geeniloukkujen tietokantojen seulonta jo olemassa olevien ES-solukloonien löytämiseksi
• Knock-out-konsortion resurssien seulonta jo olemassa olevien kohdevektorien löytämiseksi, ES-solukloonit ja -mallit

Konsultointi kohdentamisvektorin rakentamisessa – maksuton

• Genomisekvenssianalyysi sellaisten alueiden tunnistamiseksi, jotka ovat suurella todennäköisyydellä käyttökelpoisia homologia-alueita geenin kohdentamista varten
• Konsultointi ryhmän kanssa turvallisen geenin kohdentamisen edellyttämän geneettisen strategian määrittämiseksi, käyttökelpoisen mallin saavuttamiseksi
• Kohdistusvektorin rakentaminen ei ole ytimen vastuulla, mutta ydin voi avustaa kasettien ja metodologisten neuvojen toimittamisessa
• Screening-strategian laatiminen ei ole ytimen vastuulla, mutta ydin voi avustaa kasettien ja metodologisten neuvojen toimittamisessa. neuvonta

Geenin kohdentaminen alkion kantasoluihin

• Valmiin kohdentamisvektorin transfektio alkion kantasoluihin
• Vähintään 192 riippumattoman rekombinanttisolukloonin eristäminen ja varastointi
• DNA:n valmistelu ja 96 kuoppalevyjen toimittaminen seulontaa varten
• Sulatus, oletettujen positiivisten kloonien laajentaminen
• Lisä-DNA:n valmistaminen oletetuista positiivisista klooneista varmistusseulontaa varten
• Kohdekloonien karyotyyppianalyysi

ES-solukloonien blastokystainjektio

• ES-solujen injektio esi-implantaatio-alkion injektionesteeseen
• Kimairaiden tuottaminen ja asuttaminen korkeintaan 3 viikkoa.
• Suositukset jalostusstrategiaksi

.