Vaarat

Ninhydriiniliuos reagoi ihon proteiinien kanssa. Käytä suojakäsineitä tai sinulle tulee violetit kädet.

Kemikaalit ja liuokset

• Ninhydriiniliuos (0.25 % vedessä)
• Metioniini
• Hydroksiproliini

Materiaalit

• Kaksi 100 ml:n sylinteriä
• Kaksi sekoittavaa tangot
• Kaksi magneettisekoitinta
• Kaksi lastaa

Menetelmä

1. Täytä kaksi sylinteriä puoliksi ninhydriiniliuoksella.
2. Lisätään molempiin sylintereihin sekoitustanko ja aloitetaan liuosten sekoittaminen magneettisekoittimilla.
3. Toiseen sylinteriin lisätään metioniinia ja toiseen hydroksiproliinia. Anna liuosten sekoittua noin 5-10 minuuttia.
4. Noin 5 minuutin kuluttua hydroksiproliinia sisältävässä sylinterissä näkyy kullanvärisen liuoksen muodostuminen.
5. Muutamaa minuuttia myöhemmin metioniinia sisältävässä sylinterissä näkyy violetinvärisen liuoksen muodostuminen. (Husky Colors).

Keskustelu

Ninhydriini on indaani-1,2,3-trionin hydraatti. Proliinia ja hydroksiproliinia lukuun ottamatta kaikki proteiineissa esiintyvät alfa-aminohapot reagoivat ninhydriinin kanssa antaen saman voimakkaan violetin värisen anionin (570 nm). Violetti anioni koostuu kahdesta ninhydriinimolekyylistä, joista kummastakin on vähennetty hydroksiryhmät ja jotka on yhdistetty toisiinsa keskeisellä typellä. Typpi on ainoa osa violettia anionia, joka on peräisin aminohaposta.

Proliini ja hydroksiproliini eivät reagoi ninhydriinin kanssa samalla tavalla kuin muut aminohapot, koska niiden alfa-aminoryhmä on osa viisijäsenistä rengasta.