Considere la posibilidad de infección por M pneumoniae en pacientes de cualquier edad que presenten infecciones del tracto respiratorio. La investigación de laboratorio debe centrarse tanto en la enfermedad clínica (p. ej., traqueobronquitis frente a neumonía) como en las numerosas etiologías infecciosas posibles que pueden causar manifestaciones clínicamente similares. El alcance de la investigación de laboratorio también debe reflejar la gravedad de la enfermedad y si ésta justifica la hospitalización.

En hasta la mitad de los casos de neumonías adquiridas en la comunidad, nunca se determina la etiología microbiológica, a pesar de las pruebas de laboratorio adecuadas. La típica enfermedad leve causada por M pneumoniae en personas por lo demás sanas puede no justificar una investigación microbiológica exhaustiva porque el tratamiento empírico con antimicrobianos orales puede cubrir M pneumoniae y la mayoría de los demás agentes bacterianos que producen enfermedades similares.

Análisis de laboratorio

El 25% de los pacientes desarrolla leucocitosis; el resto tiene recuentos de leucocitos dentro del rango de referencia.

Los pacientes pueden tener una VSG elevada.

La respuesta celular del esputo es mononuclear, sin bacterias visibles con la tinción de Gram.

Alrededor del 75% de los pacientes tienen un título de crioaglutinina de al menos 1:32 en la segunda semana de la enfermedad, que desaparece a las 6-8 semanas. No se trata de una prueba específica para la infección por M pneumoniae, pero cuanto mayor sea el título de aglutininas frías (>1:64) en un paciente con neumonía adquirida en la comunidad, más probable es que las aglutininas frías se deban a M pneumoniae. No es probable que se produzcan anomalías específicas de la función hepática o renal.

Para confirmar la infección del tracto respiratorio por micoplasma, son necesarios el cultivo, las pruebas de base molecular y/o las pruebas serológicas.

Cultivo

Las muestras del tracto respiratorio adecuadas para el cultivo incluyen hisopos de garganta, esputo, aspirados traqueales, líquido de lavado bronquial, líquido pleural o tejido de biopsia pulmonar, dependiendo del estado clínico del paciente.

Los organismos micoplásmicos tienen requisitos de crecimiento fastidiosos y suelen ser difíciles y lentos de cultivar in vitro. Tenga cuidado durante la recogida de muestras de inocular en un medio de transporte adecuado (por ejemplo, caldo SP4 o medio de transporte universal), a la cabecera del paciente siempre que sea posible, y de no permitir la desecación. Los médicos aconsejan congelar a -70°C si las muestras no pueden transportarse al laboratorio de diagnóstico inmediatamente después de su recogida.

El crecimiento en cultivo es lento, requiriendo 3 semanas o más en algunos casos, y el cultivo no es extremadamente sensible para detectar la infección por M pneumoniae. El medio de cultivo a menudo no está disponible, excepto en los laboratorios de referencia especializados. Si se intenta el cultivo, deben realizarse también procedimientos alternativos, como la serología y/o las pruebas de amplificación de ácidos nucleicos de base molecular.

Pruebas serológicas

Los médicos utilizan con mayor frecuencia la serología para confirmar la infección por M pneumoniae, aunque estas pruebas adolecen de problemas importantes.

Muchos clínicos prefieren las pruebas inmunoenzimáticas a las más antiguas y menos sensibles pruebas de fijación del complemento y los títulos inespecíficos de aglutinina fría. Estos tipos de pruebas están ampliamente disponibles a través de los laboratorios comerciales de referencia.

Debido a que la infección primaria no garantiza la inmunidad protectora frente a futuras infecciones y a que puede quedar inmunoglobulina G (IgG) residual de encuentros anteriores con el organismo, los expertos han lanzado un gran impulso para desarrollar pruebas sensibles y específicas que puedan diferenciar entre la infección aguda y la remota.

El diagnóstico definitivo requiere una seroconversión documentada por muestras emparejadas obtenidas con 2-4 semanas de diferencia. Aunque algunos investigadores afirman que los ensayos de inmunoglobulina M (IgM) o de inmunoglobulina A (IgA) de título único revelan la infección actual, la IgM puede persistir hasta varios meses en algunas personas, y muchos adultos pueden no presentar una respuesta IgM detectable. Por lo tanto, confiar en una sola prueba serológica puede ser clínicamente engañoso, y los expertos recomiendan basar el diagnóstico de la infección aguda en la seroconversión medida simultáneamente en ensayos tanto para IgM como para IgG. El uso de la serología para el diagnóstico de la infección por micoplasma sólo es válido si el paciente tiene una capacidad satisfactoria del sistema inmunitario humoral para montar una respuesta de anticuerpos.

Ensayos inmunoenzimáticos de diagnóstico rápido

Uno de los avances más significativos de los últimos años para el diagnóstico de las infecciones del tracto respiratorio por M pneumoniae es el desarrollo de ensayos inmunoenzimáticos cualitativos, rápidos, de una sola muestra y basados en la membrana, que se adaptan fácilmente al laboratorio de la consulta del médico de atención primaria.

El sistema de prueba de anticuerpos IgG/IgM Remel (Thermo-Fisher) mide tanto la IgG como la IgM simultáneamente.

La Meridian ImmunoCard (Meridian Bioscience, Inc.) mide sólo la IgM.

Los médicos pueden realizar ambas pruebas sin necesidad de conocimientos o equipos especiales, y pueden interpretar los resultados en aproximadamente 10 minutos, eliminando la necesidad de recoger sueros emparejados para la posterior medición de anticuerpos, aunque a veces se obtienen resultados erróneos cuando sólo se analizan muestras de suero individuales.

Ambas pruebas tienen una clasificación de complejidad moderada según la Enmienda de Mejora de los Laboratorios Clínicos (CLIA), lo que permite a muchos médicos ofrecer ensayos serológicos para los anticuerpos de M pneumoniae como prueba en el punto de atención, de modo que pueda utilizarse para dirigir el tratamiento del paciente.

Estos ensayos de una sola muestra tienen limitaciones, como se ha descrito anteriormente; quizás el uso más práctico de la IgM ImmunoCard es cuando se sospecha una infección aguda por M pneumoniae en niños y adultos jóvenes.

Análisis molecular

Los investigadores han desarrollado sistemas basados en la molécula para la detección de M pneumoniae utilizando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) u otras tecnologías. Se ha descrito una variedad de objetivos genéticos para los ensayos de PCR con el fin de detectar M pneumoniae en muestras clínicas. La PCR tradicional está siendo sustituida gradualmente por ensayos de PCR cuantitativos en tiempo real. Publicaciones recientes indican que el gen de la toxina CARDS es más sensible para la detección de M pneumoniae que los ensayos dirigidos a la proteína P1 o a los genes de la ATPasa.

Algunos laboratorios de referencia ofrecen ensayos de PCR que han desarrollado ellos mismos para la detección de la infección micoplásmica actual. Dos pruebas moleculares para la detección de M pneumoniae están ahora aprobadas por la FDA para su uso en los Estados Unidos. Una de ellas es el ensayo illumigene Mycoplasma (Meridian Bioscience, Inc.). Este ensayo de amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP) permite la detección de M pneumoniae en hasta 10 muestras clínicas que pueden analizarse simultáneamente en el plazo de una hora después de que el ADN extraído se coloque en la incubadora/lectora. El FilmArray RP de Biofire Diagnostics detecta ácidos nucleicos en hisopos nasofaríngeos para 20 patógenos del tracto respiratorio, incluido el M pneumoniae, procesando una muestra a la vez, con resultados en aproximadamente una hora.

El transporte de micoplasmas en el tracto respiratorio superior durante periodos variables tras una infección previa puede confundir la interpretación de un único resultado positivo del ensayo de PCR. Además, un ensayo de PCR puede revelar un número muy pequeño de organismos que pueden no tener importancia etiológica.

No se ha establecido un umbral específico de cantidad de micoplasmas en el tracto respiratorio que pueda diferenciar la colonización de la infección, por lo que un método de detección altamente sensible como la PCR realizado de forma no cuantitativa puede sobreestimar la importancia clínica de M pneumoniae como patógeno, ya que a menudo cocircula con otros patógenos respiratorios bacterianos y virales. Por estas razones, los ensayos moleculares pueden ir acompañados de ensayos serológicos para obtener la máxima precisión diagnóstica, a menos que se analice un fluido corporal normalmente estéril en el que la presencia de cualquier número de micoplasmas se consideraría evidencia de enfermedad. Los nuevos ensayos cuantitativos de PCR en tiempo real alivian este problema hasta cierto punto.

Dadas las importantes limitaciones de la serología, el prolongado tiempo de respuesta y la insensibilidad del cultivo, y la creciente disponibilidad del diagnóstico rápido de la infección micoplásmica en pacientes sintomáticos mediante ensayos de base molecular, las pruebas de base molecular son ahora el método preferido para el diagnóstico de la infección por M pneumoniae cuando están disponibles para los médicos de atención primaria a través de un hospital o un laboratorio de referencia.