Overvej muligheden for infektion med M pneumoniae hos patienter i alle aldre, der har infektioner i luftvejene. Laboratorieundersøgelse bør fokusere på både den kliniske sygdom (f.eks. tracheobronchitis vs. pneumoni) og de mange mulige infektiøse ætiologier, der kan forårsage klinisk lignende manifestationer. Omfanget af laboratorieundersøgelser bør også afspejle sygdommens sværhedsgrad, og om sygdommen berettiger til indlæggelse på hospital.

I så mange som halvdelen af alle tilfælde af samfundserhvervede pneumonier bestemmes den mikrobiologiske ætiologi aldrig, på trods af passende laboratorieundersøgelser. Den typiske milde sygdom forårsaget af M pneumoniae hos ellers raske personer berettiger måske ikke til en omfattende mikrobiologisk undersøgelse, fordi empirisk behandling med orale antimikrobielle midler kan dække M pneumoniae og de fleste andre bakterielle agenser, der giver lignende sygdomme.

Laboratorieanalyse

25% af patienterne udvikler leukocytose; resten har leukocyttal inden for referenceområdet.

Patienterne kan have en forhøjet ESR.

Det cellulære svar i sputum er mononukleært, og der er ingen bakterier synlige ved Gramfarvning.

Omkring 75 % af patienterne har en kold agglutininintiter på mindst 1:32 i den anden uge af sygdommen, som forsvinder efter 6-8 uger. Dette er ikke en specifik test for M pneumoniae-infektion, men jo større kold agglutininintiteren er (>1:64) hos en patient med samfundserhvervet lungebetændelse, jo mere sandsynligt er det, at kold agglutinininerne skyldes M pneumoniae. Der forekommer sandsynligvis ingen specifikke abnormiteter i lever- eller nyrefunktionen.

For at bekræfte mycoplasmisk luftvejsinfektion er det nødvendigt med dyrkning, molekylærbaserede test og/eller serologiske test.

Kultur

Andre luftvejsprøver, der er egnede til dyrkning, omfatter svaberprøver fra halsen, sputum, trachealaspirat, bronkialskyllevæske, pleuravæske eller lungebiopsivæv, afhængigt af patientens kliniske tilstand.

Mykoplasmatiske organismer har krævende vækstkrav og er ofte vanskelige og langsomme at dyrke in vitro. Sørg under prøveudtagningen for at inokulere i et egnet transportmedium (f.eks. SP4-bouillon eller universelt transportmedium), så vidt muligt ved sengekanten, og lad ikke udtørring ske. Klinikere anbefaler nedfrysning ved -70 °C, hvis prøverne ikke kan transporteres til det diagnostiske laboratorium umiddelbart efter indsamling.

Vækst i kultur er langsom og kræver 3 uger eller længere i nogle tilfælde, og kulturen er ikke ekstremt følsom til påvisning af M pneumoniae-infektion. Kulturmediet er ofte ikke tilgængeligt, undtagen fra specialiserede referencelaboratorier. Hvis der forsøges dyrkning, bør der også udføres alternative procedurer, herunder serologi og/eller molekylærbaserede nukleinsyreamplifikationstest.

Serologisk testning

Læger anvender oftest serologi til at bekræfte M pneumoniae-infektion, selv om disse test lider under betydelige problemer.

Mange klinikere foretrækker enzyme-linked immunosorbent assays frem for de ældre, mindre følsomme komplementbindingsassays og uspecifikke cold agglutininin-titre. Disse typer test er bredt tilgængelige via kommercielle referencelaboratorier.

Da primær infektion ikke garanterer beskyttende immunitet mod fremtidige infektioner, og da der kan være rester af immunoglobulin G (IgG) tilbage fra tidligere møder med organismen, har eksperter sat et stort skub i udviklingen af følsomme og specifikke test, der kan skelne mellem akut og fjernbetjent infektion.

Den definitive diagnose kræver serokonversion dokumenteret ved parvise prøver, der er udtaget med 2-4 ugers mellemrum. Selv om nogle forskere hævder, at enkelttiter-immunoglobulin M (IgM) eller immunoglobulin A (IgA) assays afslører aktuel infektion, kan IgM persistere i op til flere måneder hos nogle mennesker, og mange voksne kan ikke påvise et påviseligt IgM-respons. Derfor kan det være klinisk misvisende at basere sig på en enkelt serologisk test, og eksperter anbefaler, at diagnosen af akut infektion baseres på serokonversion, der måles samtidig i assays for både IgM og IgG. Anvendelse af serologi til diagnosticering af mycoplasmisk infektion er kun gyldig, hvis patienten har en tilfredsstillende evne hos det humorale immunsystem til at danne et antistofrespons.

Snappe diagnostiske enzyme-linked immunosorbent assays

Et af de vigtigste fremskridt i de seneste år med hensyn til diagnosticering af M pneumoniae-infektioner i luftvejene er udviklingen af kvalitative, hurtige, hurtige, membranbaserede enzyme-linked immunosorbent assays, der er baseret på en enkelt prøve, og som let kan tilpasses til den primære læges laboratorium på kontoret.

Remel IgG/IgM Antibody Test System (Thermo-Fisher) måler både IgG og IgM samtidig.

Meridian ImmunoCard (Meridian Bioscience, Inc.) måler kun IgM.

Læger kan udføre begge test uden særlig ekspertise eller udstyr, og de kan fortolke resultaterne på ca. 10 minutter, hvilket eliminerer behovet for indsamling af parrede sera til senere antistofmåling, selv om der undertiden opnås fejlagtige resultater, når der kun analyseres enkelte serumprøver.

Både testene har en moderat kompleksitetsklassificering i henhold til Clinical Laboratory Improvement Amendment (CLIA), hvilket gør det muligt for mange læger at tilbyde serologiske analyser for M pneumoniae-antistoffer som en point-of-care-test, så den kan bruges til at styre patientbehandlingen.

Sådanne enkeltprøveanalyser har begrænsninger som beskrevet ovenfor; den måske mest praktiske anvendelse af IgM ImmunoCard er, når der er mistanke om en akut infektion med M pneumoniae hos børn og unge voksne.

Molekylær analyse

Forskere har udviklet molekylært baserede systemer til påvisning af M pneumoniae ved hjælp af polymerasekædereaktion (PCR) eller andre teknologier. Der er blevet beskrevet en række forskellige genmål for PCR-analyser til påvisning af M pneumoniae i kliniske prøver. Traditionel PCR bliver gradvist erstattet af kvantitative realtids-PCR-analyser. Nylige publikationer viser, at CARDS-toksin-genet er mere følsomt til påvisning af M pneumoniae end assays, der er rettet mod P1-protein- eller ATPase-generne.

En del referencelaboratorier tilbyder PCR-assays, som de selv har udviklet til påvisning af aktuel mycoplasmisk infektion. To molekylærbaserede test til påvisning af M pneumoniae er nu FDA-godkendt til brug i USA. Den ene af disse er illumigene Mycoplasma assay (Meridian Bioscience, Inc.). Dette LAMP-assay (loop-mediated isothermal amplification) gør det muligt at påvise M pneumoniae i op til 10 kliniske prøver, der kan testes samtidigt inden for en time, efter at det ekstraherede DNA er sat op i inkubatoren/aflæseren. Multiplex Biofire Diagnostics FilmArray RP påviser nukleinsyrer i nasopharyngeale svaberprøver for 20 patogener fra luftvejene, herunder M pneumoniae, og behandler en prøve ad gangen med resultater på ca. en time .

Mykoplasmaer i de øvre luftveje i varierende perioder efter en tidligere infektion kan forvirre fortolkningen af et enkelt positivt PCR-analyseresultat. Desuden kan et PCR-assay afsløre et meget lille antal organismer, som måske ikke har ætiologisk betydning.

Der er ikke fastlagt en specifik tærskel for mængden af mycoplasmaer i luftvejene, som kan skelne kolonisering fra infektion, så en meget følsom påvisningsmetode som PCR, der udføres på en ikke-kvalitativ måde, kan overvurdere den kliniske betydning af M pneumoniae som patogen, da den ofte cirkulerer sammen med andre bakterielle og virale luftvejspatogener. Af disse grunde kan molekylærbaserede assays ledsages af serologiske assays for at opnå maksimal diagnostisk nøjagtighed, medmindre man tester en normalt steril kropsvæske, hvor tilstedeværelsen af et hvilket som helst antal mycoplasmaer ville blive betragtet som tegn på sygdom. Nyere kvantitative realtids-PCR-assays afhjælper dette problem til en vis grad.

I betragtning af de betydelige begrænsninger ved serologi, den lange ekspeditionstid og ufølsomhed ved dyrkning og den stigende tilgængelighed af hurtig diagnosticering af mycoplasmisk infektion hos symptomatiske patienter ved hjælp af molekylærbaserede assays, er molekylærbaserede tests nu den foretrukne metode til diagnosticering af M pneumoniae-infektion, når de er tilgængelige for læger i primærsektoren via et hospital eller et referencelaboratorium.