Cervikal infektion med Herpes simplex virus, Chlamydia trachomatis og Neisseria gonorrhoeae blandt symptomatiske kvinder i Dubai, UAE: En molekylær tilgang
Abstract
Tragisk nok er infektioner i kønsorganerne stadig et stort folkesundhedsproblem i mange regioner. Denne undersøgelse blev foretaget for at bestemme prævalensen af livmoderhalsinfektion med Herpes simplex virus (HSV), Chlamydia trachomatis (CT) og Neisseria gonorrhoeae (NG) blandt gifte kvinder, der henvises til Iranian Hospital, Dubai, UAE. I en retrospektiv tværsnitsundersøgelse blev 201 kvindelige patienter i alderen 16-80 år, som blev henvist til obstetrisk og gynækologisk afdeling på Iranian Hospital, Dubai, UAE, i 2010, tilmeldt. Patienterne blev inddelt i tre aldersgrupper: 15-30 år (gruppe I), 31-40 år (gruppe II) og 41 år (gruppe III). Der blev indsamlet en cervikal svaberprøve fra hver kvinde, og prævalensen af cervikal infektion med HSV, CT og NG blev bestemt ved hjælp af PCR-metoden. HSV, CT og NG blev påvist i henholdsvis 6,5 %, 10,4 % og 5,5 % af svaberprøverne. Med hensyn til alder blev der konstateret en signifikant forskel for prævalensen af NG og HSV mellem gruppe I og III. På grund af betydningen for folkesundheden af seksuelt overførte sygdomme (STD’er), deres langvarige indvirkning på livskvaliteten og deres økonomiske byrde synes det nødvendigt med forebyggende foranstaltninger og uddannelse af kvinder.
1. Indledning
Tragisk nok er infektioner i kønsorganerne stadig et stort folkesundhedsproblem i mange regioner . I USA blev der årligt rapporteret om mere end 15 millioner nye tilfælde af seksuelt overførte sygdomme (STD’er) . Blandt kvinder kan nogle af dem føre til langvarige bækkenbetændelsessygdomme, infertilitet, graviditeter uden for livmoderen, dyspareuni og livmoderhalskræft . Hvert år forekommer mere end halvdelen af alle nye tilfælde af kønssygdomme hos unge mellem 15 og 24 år . Desuden kan de hos unge og unge kvinder resultere i depression, lav social støtte og fremtrædende stress .
De fleste kønssygdomme såsom Herpes simplex virus (HSV), Chlamydia trachomatis (CT) og Neisseria gonorrhoeae (NG) har vist sig at være asymptomatiske hos kvinder . Genital herpes betragtes generelt som en almindelig kronisk kønssygdom i både udviklede lande og udviklingslande med en betydelig morbiditet . Infektionen er forårsaget af to typer virus, herunder HSV-2 (hovedsageligt) og HSV-1 (undertiden), mens deres prævalens og forekomst er steget i de sidste tre årtier .
CT-infektion er den hyppigste årsag til bakteriel kønssygdom i verden, især hos unge kvinder . Infektionen er asymptomatisk i de fleste tilfælde og kan overføres under vaginal, oral eller anal seksuel kontakt og kan også overføres af moderen til nyfødte .
Gonoré er forårsaget af NG, og det blev påvist, at dette patogen har potentiale til at udvikle resistens over for hyppigt anvendte antimikrobielle midler, især hos ubehandlede patienter. Disse tilfælde kan fortsætte med at overføre og fremme den hurtige fremkomst af antimikrobiel resistens . Sygdommens incidens er høj; derfor er diagnosticering af både symptomatiske og asymptomatiske infektioner af stor betydning .
I de seneste år er der blevet anvendt hurtige detektionskits og dipsticks som almindelige, praktiske og hurtige metoder til screening for kønssygdomme. Nye molekylære metoder som PCR, kvalitativ og kvantitativ realtids-PCR og DNA-hybridisering er imidlertid blevet introduceret som mere pålidelige teknikker til diagnosticering af en lang række STD’er i sammenligning med serologiske metoder. Desuden kan overvågning af DNA-niveauet af et patogen i kropsvæsker afsløre sygdommens status, dens reaktion på medicinering og dens resistensmønstre .
I Dubai, UAE, har den enkeltes livsstil ændret sig. Desuden blev mange vandrende arbejdstagere eller investorer tiltrukket fra mere end 100 lande fra Asien, Afrika, Europa osv. til denne by. Da Dubai er den 8. mest besøgte by i verden af turister og har vist sig at tiltrække mere end 15 millioner turister fra forskellige lande indtil 2015, kan kønssygdomme derfor være et nyt folkesundhedsproblem i Dubai, UAE. Screening af kønssygdomme i befolkningen i Dubai kan være det første og meget vigtige skridt i håndteringen af et folkesundhedsproblem. Formålet med denne undersøgelse var at bestemme prævalensen af livmoderhalsinfektion med HSV, CT og NG blandt gifte kvinder, der henvises til Iranian Hospital, Dubai, UAE.
2. Emner og metoder
2.1. Undersøgelsespopulation
Undersøgelsen omfattede 201 kvindelige patienter i alderen 16-80 år ( år), som henviste til Obstetrik og gynækologisk afdeling på Iranian Hospital, Dubai, i 2010 med symptomer som kløe i genitalområdet, dyspareunia, dysuri eller unormale vaginale udflåd. Patienterne var af forskellige nationaliteter (tabel 1), og alle var gift. Patienterne blev inddelt i tre aldersgrupper: 15-30 år (gruppe I), 31-40 år (gruppe II) og ≥41 år (gruppe III). Der blev indsamlet en cervikal svaberprøve ved hjælp af sterile svaberprøver fra alle patienterne og blev overført i et viralt transportmedium til Professor Alborzi Clinical Microbiology Research Center, Nemazee Hospital, Shiraz, Iran, med henblik på yderligere undersøgelser. Undersøgelsen blev godkendt af Office of Education and Research of Iranian Hospital, Dubai.
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2.2. DNA-ekstraktion
DNA blev ekstraheret fra svaberprøver i 200 μL viralt transportmedium ved hjælp af Invisorb spin virus DNA Mini Kit (Invitek, Berlin, Tyskland) i henhold til producentens protokol. Til påvisning af CT blev en standardiseret mængde intern kontrol-DNA, der blev leveret sammen med realtids-PCR-sættet, tilsat lysisbufferkittet for at overvåge ekstraktionernes effektivitet. Negative og positive kontroller blev inkluderet i ekstraktionsprocessen.
2.3. Kvantitativ realtids-PCR til påvisning af HSV og CT
Den kvantitative realtids-PCR blev udført ved hjælp af oligonukleotidprimerpar og sonder, der er specifikke for regionen af HSV1 og HSV2 glycoprotein B (gB), som tidligere rapporteret . De anvendte primere var HSVFP (5′TCC CGG TAC GAA GAA GAC CAG3′) og HSVRP (5′AGC AGG CCG CCG CTG CTG TCC TTG3′), og sonden var HSVTCP (5′FAMTGG TCC TCC TCC AGC ATG GTG ATG ATG TTG TTG/C AGG TCGTAMRA3′). Reaktionen blev udført med følgende protokol: 2 min. inkubation ved 50 °C til AmpErase-aktivering, 10 min. ved 95 °C til polymeraseaktivering og i 45 cyklusser, 15 sekunder ved 94 °C til denaturering og 60 sekunder ved 58 °C til annealing, forlængelse og dataindsamling. Hver 50 μL PCR-blanding indeholdt 10 μL oprenset DNA, 840 nM koncentration af hver primer og 100 nM sonde i 1x TaqMan universal PCR master mix (Applied Biosystems, Branchburg, New Jersey, USA).
Til påvisning af CT blev der udført en kvantitativ PCR i realtid med oligonukleotidprimerpar og sonde specifik for CT-genom ved hjælp af Advanced Kit (PrimerDesign Ltd., Millbrook Technology Campus, South Hampton, UK). Amplifikationen blev udført ved hjælp af TaqMan universal real time PCR master mix-reagenser (Roche, Branchburg, New Jersey, USA). Den blev udført med følgende protokol i fire trin: 2 min. inkubation ved 50 °C til AmpErase-aktivering, 10 min. ved 95 °C til polymeraseaktivering og i 45 cyklusser, 10 sekunder ved 95 °C til denaturering og 60 sekunder ved 60 °C til annealing, forlængelse og dataindsamling.
Alle amplifikationer blev udført i en Applied Biosystem Sequence Detector 7500-maskine (Applied Biosystems, USA). Negative kontroller blev inkluderet i ekstraktionsprocessen mellem hver 20 kliniske prøver. Alle de negative prøver blev testet to gange.
2.4. Påvisning af NG
NG blev påvist med et PCR-detektionssæt (CinnaGen Inc., Iran) i overensstemmelse med producentens protokol. Reaktionsblandingen blev opvarmet ved 94 °C i 3 min. og derefter inkuberet i 35 cyklusser ved 94 °C i 45 sekunder, 50 °C i 20 sekunder og 72 °C i 30 sekunder og i 5 min. ved 72 °C for en yderligere forlængelse. PCR-produkterne blev analyseret på 1% agarosegel.
2.5. Statistisk analyse
Differencer i prævalens af HSV, CT og NG mellem aldersgrupper blev analyseret med chi-square-test. Desuden blev sammenhængen mellem HSV, CT og NG og forekomsten af svampebakteriel cervikal infektion analyseret med chi-square test. Alle data blev analyseret ved hjælp af SPSS-software (SPSS for Windows, version 16, SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Alle værdier af blev betragtet som statistisk signifikante.
3. Resultater
Candida spp. og Coccobacilli cervikal infektion blev betragtet som svampebakteriel infektion med en prævalens på 45,3 % og ikke-svampebakteriel infektion med en prævalens på 54,7 %. HSV og CT var positive i henholdsvis 13 (6,5 %) og 21 (10,4 %) svaberprøver. HSV-DNA-kopiantalet målt ved realtids-PCR-assayet varierede fra 3,11 × 103 til 7,18 × 105 kopier/mL i viraltransportmediet (median på 4 × 104 kopier/mL) og CT-DNA-kopiantalet varierede fra 3,48 × 103 til 7,11 × 106 kopier/mL i viraltransportmediet (median på 3,33 × 105 kopier/mL). NG blev påvist hos 11 (5,5 %) patienter.
Tabel 2 viser prævalensen af sygdommene i de forskellige aldersgrupper. Ingen af patienterne havde blandede infektioner. Der var ingen signifikante forskelle i prævalensen af CT mellem de forskellige aldersgrupper (). Prævalensen af NG og HSV var ikke signifikant forskellig mellem gruppe I og II og II og III (); der var dog signifikante forskelle mellem gruppe I og III (). Desuden var forskellene i prævalensen af HSV-, CT- og NG-infektioner ikke statistisk signifikante mellem gruppen med svampebakteriel cervikalinfektion og gruppen uden svampebakteriel infektion (). Tabel 3 sammenligner vores data i Dubai, UAE, for prævalens af HSV, CT og NG med forskellige undersøgelser.
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4. Diskussion
I den aktuelle undersøgelse var ud af 201 kvinder henholdsvis 6,5 %, 10,4 % og 5,5 % inficeret med HSV, CT og NG. Vores nuværende resultater vedrørende HSV-, CT- og NG-infektion er i overensstemmelse med tidligere undersøgelser om prævalensen af kønssygdomme. For nylig blev der i en lignende undersøgelse fundet HSV-2-DNA hos 7 % af 509 kvinder i USA . En tidligere undersøgelse i Tyrkiet viste, at 12,7 % af lavrisikokvinderne var smittet med CT . Gaydos et al. rapporterede, at 3,8 % af deres undersøgte kvindelige populationer var smittet med NG .
Den tidligere litteratur viste, at størstedelen af HSV-, CT- og NG-infektioner kan være asymptomatiske og langvarige . På samme måde var ingen af kvinderne i den foreliggende undersøgelse klar over sin infektion, før de gennemgik screening; nogle kliniske symptomer var dog synlige. Prævalensen af kønssygdomme var konsekvent højere i højrisikopopopulationer sammenlignet med dem, der anses for at have en lavere risiko. Blandt de almindeligt nævnte risikofaktorer i forbindelse med kønssygdomme er ugift status og flere seksuelle partnere . I Amsterdam, Nederlandene, blev den højeste prævalens af HSV-1 eller HSV-2 konstateret i de yngste aldersgrupper, mens teenagere og voksne i 20’erne havde en prævalens på henholdsvis 5,26 % og 4,31 % . I Peru var prævalensen af infektion hos kvinder med CT-infektion 6-5 %, og med NG-infektion var den 0-1 % . I Sydkorea var den samlede påvisningsrate for CT 2,4 % og for HSV type II 0,8 % . Hos kvindelige sexarbejdere i Tunesien var CT, NG og HSV-2 PCR positive hos henholdsvis 72,9 %, 11,2 % og 1,1 % af kvinderne .
Og selv om tidligere undersøgelser har vist, at ung alder er forbundet med positive resultater for CT, er der nogle undersøgelser, der ikke rapporterede nogen sammenhæng mellem alder og sygdomsforekomst . Tilsvarende viste vores resultater, at der ikke var nogen signifikant forskel i prævalensen af CT mellem forskellige aldersgrupper.
Flere undersøgelser viste, at HSV-prævalensen konsekvent steg med alderen i de fleste geografiske områder . Som forventet viste resultaterne af den foreliggende undersøgelse, at prævalensen af HSV var signifikant højere i gruppe III sammenlignet med gruppe I. En lignende undersøgelse i Bangladesh viste, at prævalensen af HSV-2 antistoffer var lav blandt gifte kvinder yngre end 20 år gamle . Følgelig steg denne prævalens med alderen, hvilket kan være relateret til varigheden af seksuelt aktive år hos kvinder.
I modsætning hertil viste vores resultater, at prævalensen af NG faldt med alderen, og der var en signifikant forskel i prævalensen af infektionen mellem gruppe I og III, og infektionen var mere udbredt hos unge kvinder. Dette resultat er inkonsistent med en anden undersøgelse . I Nigeria var NG-infektion mere almindelig hos kvinder i en alder af 25 år .
En undersøgelse i Kina blandt kvindelige sexarbejdere viste, at 8 % af de undersøgte populationer var inficeret med NG, hvilket var tæt på infektionsraten hos unge kvinder. Selv om alle kvinderne i denne undersøgelse var gift, og de havde ikke seksuelle forhold uden for familien, var prævalensen af kønssygdomme hos disse patienter høj. Det er dog nødvendigt at evaluere partnerens seksuelle forhold. En tidligere undersøgelse i Frankrig viste, at blandt 111 asymptomatiske mandlige partnere til infertile par blev CT påvist ved PCR COBAS AMPLICOR- og serologitest hos henholdsvis 6,3 % og 4,5 % af patienterne . Derfor ser det ud til, at overvågning af seksuelle partnere er afgørende for forebyggelse af kønssygdomme.
Svamp-bakteriel livmoderhalsinfektion blev fundet i 45,3% af den undersøgte befolkning, men der var ingen signifikante forskelle i prævalensen af HSV, CT og NG-infektioner mellem svamp-bakteriel livmoderhalsinfektionsgruppe og ikke-svamp-bakteriel gruppe. Det blev vist, at blandede infektioner med bakteriel eller svampet vaginose og kønssygdomme kan forekomme, såsom HSV, CT, NG og T. vaginalis . Der er behov for yderligere undersøgelser for at foretage en omfattende evaluering af den rolle, som bakteriel og svampeinfektion i livmoderhalsen spiller for patogenesen af HSV, CT, NG og andre kønssygdomme. Overvågning af prævalensen og forekomsten af kønssygdomme i befolkningen og især blandt unge vil hjælpe de offentlige myndigheder med at gennemføre og evaluere de forebyggende strategier og indsatser. På grund af STD’ernes betydelige og langvarige indvirkning på livskvaliteten og de økonomiske tab som følge af STD’er på grund af de høje lægeudgifter er der behov for en nøjagtig evaluering af STD’er i hele verden. Jerman et al. rapporterede, at der i 2005 opstod 1,1 millioner nye tilfælde af kønssygdomme blandt unge patienter i Californien med direkte medicinske omkostninger på 1,1 milliarder USD . Desuden er symptomatiske kønssygdomme kun toppen af isbjerget, og de fleste af disse sygdomme er asymptomatiske. Screeningprogrammer for kønssygdomme er derfor vigtige i alle lande for at forhindre overførsel af sygdommen og hjælpe forskerne med at planlægge nye behandlingsprotokoller. På grund af STD’ernes betydning for folkesundheden synes det nødvendigt med forebyggende foranstaltninger og uddannelse af kvinder.
Interessekonflikter
Forfatterne erklærer, at der ikke er nogen interessekonflikter i forbindelse med offentliggørelsen af denne artikel.
Akkreditering
Forfatterne sætter pris på samarbejdet med det iranske hospital, især afdelingerne for patologi og obstetrik og gynækologi.