Referenční rozsahy

Referenční rozsahy pro stejné metody nebo přístroje se mohou v různých laboratořích a zeměpisných oblastech lišit z následujících důvodů:

1. Operační podmínky jsou různé.
2. Kritéria pro výběr zdravých subjektů jsou různá.
3. Populace pacientů se liší.
4. Geografické oblasti se liší teplotou, nadmořskou výškou, barometrickým tlakem, vlhkostí a časovým pásmem.
5. Příprava subjektů a odběr vzorků se mohou lišit.

Vzhledem k těmto rozdílům by měla být referenční rozmezí stanovena lokálně vždy, když se zavádí nový test nebo se mění stávající metoda. NCCLS doporučuje pro stanovení statisticky významného referenčního intervalu testovat nejméně 120 vzorků pacientů. Jiní odborníci doporučují minimálně 200 vzorků k zajištění stabilních dolních a horních referenčních mezí.

Možná bude nutné rozdělit referenční rozsahy do dělících skupin. Například referenční rozmezí hemoglobinu by měla být stanovena podle pohlaví a věku, zatímco rozmezí kortizolu by měla být rozdělena podle denní doby. Každá dělící skupina by měla obsahovat 120 vzorků.

Může být také nutné kontrolovat preanalytické faktory, aby bylo zajištěno získání přesných referenčních rozmezí. Některé faktory, které je třeba zvážit, jsou: načasování odběru, konzumace jídla, vody a alkoholu v posledních 24 hodinách, místo venepunkce, doba škrcení a typ odběrové zkumavky. Vzorky, které mají být použity pro stanovení referenčních rozmezí, by měly být odebírány a zpracovávány stejně jako běžné laboratorní práce.

Při analýze údajů o referenčních rozmezích lze použít dva přístupy, parametrický a neparametrický. Parametrický přístup zahrnuje výpočet průměru a směrodatné odchylky pro určení rozsahu hodnot, které spadají do 95% intervalu spolehlivosti. Před použitím této metody je třeba prozkoumat rozdělení populace, aby se zajistilo, že se jedná o Gaussovo (zvonové) rozdělení. Pokud je rozdělení populace zkreslené, parametrická statistika není platná. Rozdělení populace lze vizualizovat vykreslením histogramu četností v tabulkovém procesoru, například v programu Excel. Protože je toto cvičení časově velmi náročné, často se volí neparametrický přístup.

Neparametrický přístup zahrnuje stanovení hodnot připadajících na 2,5 a 97,5 percentil populace jako dolní a horní referenční meze. Prvním krokem je zadat hodnoty analytu do tabulky a seřadit je vzestupně podle velikosti. Počet hodnot v souboru údajů se pak vynásobí 0,025 a 0,975, aby se získaly percentilové pořadí horní a dolní referenční meze. Pokud by například soubor údajů obsahoval 120 vzorků, percentilové pořadí 2,5 a 97,5 by se vypočítalo vynásobením;

120 x 0,025 = 3

120 x 0,975 = 117

Dolní referenční mez by bylo třetí číslo od začátku (shora) seřazeného seznamu a horní referenční mez by bylo třetí číslo od (konce) dolů. Referenčním rozsahem by bylo středních 95 % údajů, které spadají mezi 3. a 117. hodnotu

Outliers mohou mít podstatný vliv na výpočet referenčních rozsahů touto metodou a měly by být odstraněny. Odlehlé hodnoty jsou datové body, které leží mimo většinu populace. Ačkoli pro identifikaci odlehlých hodnot existují počítačové programy a vzorce, žádný z nich není účinnější než vizuální zkoumání dat. Odlehlé hodnoty jsou výsledky, které se liší od průměru o více než 3 SD nebo se liší od ostatních výsledků o více než 30 %.

Konsensuální referenční intervaly

Referenční intervaly pro některé analyty jsou stanoveny konsensem lékařských odborníků na základě výsledků studií klinických výsledků. Například Americká diabetologická asociace vypracovala konsenzuální hodnoty pro glukózu a hemoglobin A1c. Další příklady konsenzuálních referenčních intervalů jsou shrnuty v následující tabulce.

Pokud jsou k dispozici konsenzuální referenční intervaly, klinické laboratoře uvádějí tyto hodnoty namísto stanovení vlastního referenčního rozmezí.

Ověření referenčního intervalu

Ověření referenčního rozmezí je něco jiného než stanovení referenčního rozmezí. U testovací metody schválené FDA může klinická laboratoř přijmout referenční rozmezí stanovené výrobcem, pokud její soubor pacientů poskytuje podobné výsledky jako výsledky zveřejněné v příbalovém letáku výrobce.

Mělo by být testováno celkem 40 vzorků, 20 od zdravých mužů a 20 od zdravých žen, a výsledky porovnány s publikovaným referenčním rozmezím. Výsledky by měly být rovnoměrně rozloženy v celém publikovaném referenčním rozmezí a neměly by se shlukovat na jednom konci. Pokud 95 % výsledků spadá do zveřejněného referenčního rozmezí, lze jej přijmout k použití. Pokud nelze validovat referenční rozmezí výrobce, musí laboratoř stanovit vlastní referenční rozmezí.

Verifikace referenčního rozmezí je užitečná také v případě, že je příliš obtížné shromáždit velký počet vzorků pro stanovení nového referenčního rozmezí. V této situaci je přípustné určit, zda je použitelný referenční rozsah uvedený výrobcem, váš stávající referenční rozsah nebo referenční rozsah stanovený jinou sousední laboratoří používající stejný přístroj a činidla.